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Live Imaging of Cell Motility and Actin Cytoskeleton of Individual Neurons and Neural Crest Cells in Zebrafish Embryos

The zebrafish is an ideal model for imaging cell behaviors during development in vivo. Zebrafish embryos are externally fertilized and thus easily ...

A new strategy for the aryl annulation of cyclic ketones is described. Palladium(0) coupling of a propargyl alcohol with the enol triflate of a ketone and addition of vinylmagnesium chloride generates a triene as a magnesium chelate that may be quenched with an electrophile. In some cases, the triene cyclizes under the reaction conditions. Aromatization is accomplished by exposure to manganese dioxide or dichlorodicyanoquinone (DDQ). [reaction: see text]

Aryl annulation of cyclic ketones via a magnesium carbometalation-6-pi- electrocyclization protocol.

Aryl Anellierung cyclischer Ketone &#xFC;ber ein Magnesium Carbometallierung-6-pi-Elektrocyclisierung Protokoll.

Acetylenic allenophanes: an asymmetric synthesis of a Bis(alleno)-bis(butadiynyl)-meta-cyclophane.

Acetylenischer Allenophane: eine asymmetrische Synthese eines Bis (alleno)-Bis (Butadiinyl)-meta-cyclophan.

The essential biosynthetic pathway to l-Lysine in bacteria and plants is an attractive target for the development of new antibiotics or herbicides because it is absent in humans, who must acquire this amino acid in their diet. Plants use a shortcut of a bacterial pathway to l-Lysine in which the pyridoxal-5'-phosphate (PLP)-dependent enzyme ll-diaminopimelate aminotransferase (LL-DAP-AT) transforms l-tetrahydrodipicolinic acid (L-THDP) directly to LL-DAP. In addition, LL-DAP-AT was recently found in Chlamydia sp., suggesting that inhibitors of this enzyme may also be effective against such organisms. In order to understand the mechanism of this enzyme and to assist in the design of inhibitors, the three-dimensional crystal structure of LL-DAP-AT was determined at 1.95 A resolution. The cDNA sequence of LL-DAP-AT from Arabidopsis thaliana (AtDAP-AT) was optimized for expression in bacteria and cloned in Escherichia coli without its leader sequence but with a C-terminal hexahistidine affinity tag to aid protein purification. The structure of AtDAP-AT was determined using the multiple-wavelength anomalous dispersion (MAD) method with a seleno-methionine derivative. AtDAP-AT is active as a homodimer with each subunit having PLP in the active site. It belongs to the family of type I fold PLP-dependent enzymes. Comparison of the active site residues of AtDAP-AT and aspartate aminotransferases revealed that the PLP binding residues in AtDAP-AT are well conserved in both enzymes. However, Glu97* and Asn309* in the active site of AtDAP-AT are not found at similar positions in aspartate aminotransferases, suggesting that specific substrate recognition may require these residues from the other monomer. A malate-bound structure of AtDAP-AT allowed LL-DAP and L-glutamate to be modelled into the active site. These initial three-dimensional structures of LL-DAP-AT provide insight into its substrate specificity and catalytic mechanism.

Crystal structure of LL-diaminopimelate aminotransferase from Arabidopsis thaliana: a recently discovered enzyme in the biosynthesis of L-lysine by plants and Chlamydia.

Die wesentliche biosynthetischen Pathway, l-Lysin in Bakterien und Pflanzen ist ein attraktives Ziel f&uuml;r die Entwicklung neuer Antibiotika oder Herbizide, denn es fehlt beim Menschen, die diese Aminos&auml;ure in ihrer Ern&auml;hrung erwerben m&uuml;ssen. Pflanzen verwenden eine Verkn&uuml;pfung von einer bakteriellen Weg zum l-Lysin, das Pyridoxal-5&#39;-Phosphat (PLP)-abh&auml;ngige Enzym-ll-Diaminopimelate-Aminotransferase (LL-DAP-AT) wandelt l-Tetrahydrodipicolinic S&auml;ure (L-THDP) direkt an die LL-DAP. Dar&uuml;ber hinaus wurde LL-DAP-AT vor kurzem gefunden Chlamydia SP., was darauf hindeutet, dass dieses Enzym-Inhibitoren auch wirksam gegen solche Organismen. Um den Mechanismus dieses Enzyms zu verstehen und das Design von Inhibitoren zu unterst&uuml;tzen, wurde die dreidimensionale Kristallstruktur von LL-DAP-AT bei 1,95 A Aufl&ouml;sung bestimmt. Die cDNA-Sequenz von LL-DAP-AT von Arabidopsis Thaliana (AtDAP-AT) wurde optimiert f&uuml;r Ausdruck in Bakterien und in Escherichia coli ohne seinen F&uuml;hrer-Sequenz, aber mit einer C-terminalen Hexahistidine Affinit&auml;t Tag zur Unterst&uuml;tzung der Proteinreinigung geklont. Die Struktur des AtDAP-AT war bestimmt mit der Multiple-Wellenl&auml;nge anomale Dispersion (MAD)-Methode mit einem Selo-Methionin-Derivat. AtDAP-AT ist mit jeder Untereinheit mit PLP in der aktiven Site als ein Homodimer t&auml;tig. Es geh&ouml;rt zur Familie der Typ ich Falte PLP-abh&auml;ngige Enzyme. Vergleich der aktiven Site R&uuml;ckst&auml;nde des AtDAP-AT und Aspartat-Aminotransferases ergab, dass die PLP-Bindung-R&uuml;ckst&auml;nde in AtDAP-AT in beide Enzyme gut konserviert sind. Jedoch sind Glu97 * und Asn309 * in der aktiven Site AtDAP-at nicht gefunden an &auml;hnliche Positionen in Aspartat-Aminotransferases, was darauf hindeutet, dass spezifische Substrat Anerkennung dieser R&uuml;ckst&auml;nde aus den anderen Monomer verlangen kann. Eine Struktur Malat gebundenen AtDAP-at erlaubt LL-DAP und L-Glutamat in der aktiven Site modelliert werden. Diese ersten dreidimensionalen Strukturen der LL-DAP-AT einen Einblick in seine Substratspezifit&auml;t und katalytische Mechanismus.

Kristallstruktur von LL-Diaminopimelate-Aminotransferase aus Arabidopsis Thaliana: ein vor kurzem entdeckte Enzym in die Biosynthese von L-Lysin von Pflanzen und Chlamydien.

The induction and migration of neural crest cells (NCCs) are essential to the development of craniofacial structures and the peripheral nervous system. A critical step in the development of NCCs is the epithelial to mesenchymal transition (EMT) that they undergo in order to initiate migration. Several transcription factors are important for the NCC EMT. However, less is known about the effectors regulating changes in cell adhesion, the cytoskeleton, and cell motility associated with the EMT or about specific changes in the behavior of cells undergoing EMT in vivo. We used time-lapse imaging of NCCs in the zebrafish hindbrain to show that NCCs undergo a stereotypical series of behaviors during EMT. We find that loss of cell adhesion and membrane blebbing precede filopodial extension and the onset of migration. Live imaging of actin dynamics shows that actin localizes differently in blebs and filopodia. Moreover, we find that disruption of myosin II or Rho-kinase (ROCK) activity inhibits NCC blebbing and causes reduced NCC EMT. These data reveal roles for myosin II and ROCK in NCC EMT in vivo, and provide a detailed characterization of NCC behavior during EMT that will form a basis for further mechanistic studies.

Rho-kinase and myosin II affect dynamic neural crest cell behaviors during epithelial to mesenchymal transition in vivo.

Die Induktion und Migration der Neuralleistenzellen (nationalen Falschgeldzentren) sind wesentlich f&uuml;r die Entwicklung von kraniofazialen Strukturen und das periphere Nervensystem. Ein entscheidender Schritt in der Entwicklung der nationalen Falschgeldzentren ist die epitheliale Mesenchymale &Uuml;bergang (EMT), die sie durchmachen, um die Migration zu initiieren. Mehrere Transkriptionsfaktoren sind wichtig f&uuml;r die NCC-EMT. Jedoch ist weniger bekannt, &uuml;ber die Effektoren regulieren &Auml;nderungen im Zelladh&auml;sion, Zytoskelett und Zelle Motilit&auml;t der EMT zugeordnet oder &uuml;ber spezifische &Auml;nderungen im Verhalten der Zellen in der EMT in-vivo. Wir verwendeten Zeitraffer Bildgebung der nationalen Falschgeldzentren in der Zebrafisch-Hinterhirn um zu zeigen, dass die nationalen Falschgeldzentren etliche stereotypische Verhaltensweisen w&auml;hrend EMT zu unterziehen. Wir finden diesen Verlust der Zelle Adh&auml;sion und Membran Blebbing vorausgehen, Filopodial-Erweiterung und dem Beginn der Migration. Leben Bildgebung der Aktin-Dynamik zeigt, dass diese Aktin anders in DNAblebs und Filopodium lokalisiert. Dar&uuml;ber hinaus finden wir, dass die St&ouml;rung des Myosin II oder Rho-Kinase (ROCK) Aktivit&auml;t NCC Blebbing hemmt und Ursachen reduziert NCC EMT. Diese Daten geben Sie Rollen f&uuml;r Myosin II und ROCK in NCC EMT in-vivo und bieten eine detaillierte Charakterisierung der NCC Verhalten w&auml;hrend der EMT, die eine Grundlage f&uuml;r weitere mechanistische Studien bilden wird.

Rho-Kinase und Myosin II beeinflussen das dynamische Neuralleiste Zelle Verhalten w&auml;hrend der epithelialen, mesenchymale &Uuml;bergang in-vivo.

LL-Diaminopimelate aminotransferase (LL-DAP-AT), a pyridoxal phosphate (PLP)-dependent enzyme in the lysine biosynthetic pathways of plants and Chlamydia, is a potential target for the development of herbicides or antibiotics. This homodimeric enzyme converts L-tetrahydrodipicolinic acid (THDP) directly to LL-DAP using L-glutamate as the source of the amino group. Earlier, we described the 3D structures of native and malate-bound LL-DAP-AT from Arabidopsis thaliana (AtDAP-AT). Seven additional crystal structures of AtDAP-AT and its variants are reported here as part of an investigation into the mechanism of substrate recognition and catalysis. Two structures are of AtDAP-AT with reduced external aldimine analogues: N-(5'-phosphopyridoxyl)-L-glutamate (PLP-Glu) and N-(5'-phosphopyridoxyl)- LL-Diaminopimelate (PLP-DAP) bound in the active site. Surprisingly, they reveal that both L-glutamate and LL-DAP are recognized in a very similar fashion by the same sets of amino acid residues; both molecules adopt twisted V-shaped conformations. With both substrates, the alpha-carboxylates are bound in a salt bridge with Arg404, whereas the distal carboxylates are recognized via hydrogen bonds to the well-conserved side chains of Tyr37, Tyr125 and Lys129. The distal C(epsilon) amino group of LL-DAP is specifically recognized by several non-covalent interactions with residues from the other subunit (Asn309*, Tyr94*, Gly95*, and Glu97* (Amino acid designators followed by an asterisk (*) indicate that the residues originate in the other subunit of the dimer)) and by three bound water molecules. Two catalytically inactive variants of AtDAP-AT were created via site-directed mutagenesis of the active site lysine (K270N and K270Q). The structures of these variants permitted the observation of the unreduced external aldimines of PLP with L-glutamate and with LL-DAP in the active site, and revealed differences in the torsion angle about the PLP-substrate bond. Lastly, an apo-AtDAP-AT structure missing PLP revealed details of conformational changes induced by PLP binding and substrate entry into the active site.

Mechanism of substrate recognition and PLP-induced conformational changes in LL-diaminopimelate aminotransferase from Arabidopsis thaliana.

LL-Diaminopimelate-Aminotransferase (LL-DAP-AT), eine Pyridoxalphosphat (PLP)-abh&auml;ngige Enzym in die Lysin biosynthetischen Bahnen von Pflanzen und Chlamydien, ist ein potenzielles Ziel f&uuml;r die Entwicklung von Herbiziden oder Antibiotika. Dieses Enzym Homodimeric L-Tetrahydrodipicolinic S&auml;ure (THDP) direkt in die LL-DAP konvertiert mithilfe von L-Glutamat als Quelle f&uuml;r die Aminogruppe. Vorher beschrieben wir die 3D Strukturen der einheimischen und Malat gebundenen LL-DAP-AT von Arabidopsis Thaliana (AtDAP-AT). Sieben zus&auml;tzliche Kristallstrukturen von AtDAP-AT und ihre Varianten werden berichtet hier im Rahmen einer Untersuchung in den Mechanismus der Substrat-Anerkennung und Katalyse. Zwei Strukturen sind AtDAP-at mit reduzierter externer Aldimine-Analoga: N-(5&#39;-phosphopyridoxyl)-L-Glutamat (PLP-Glu) und N-(5&#39;-phosphopyridoxyl)-LL-Diaminopimelate (PLP-DAP) in der aktiven Site gebunden. &Uuml;berraschenderweise zeigen sie, dass sowohl L-Glutamat und LL-DAP von identische Gruppen von Aminos&auml;uren in sehr &auml;hnlicher Weise erkannt werden; Beide Molek&uuml;le treffen verdrehte v-f&ouml;rmige Konformationen. Mit beiden Substrate sind die Alpha-Carboxylates in eine Salzbr&uuml;cke mit Arg404, gebunden, w&auml;hrend der distale Carboxylates &uuml;ber Wasserstoffbr&uuml;cken zu den Stadtgrundriss Seitenketten von Tyr37, Tyr125 und Lys129 erkannt werden. Der distalen C(epsilon) Aminogruppe LL-DAP ist ausdr&uuml;cklich anerkannt, indem mehrere nicht-kovalente Wechselwirkungen mit R&uuml;ckst&auml;nden aus der anderen Untereinheit (Asn309 *, Tyr94 *, Gly95 * und Glu97 * (Amino Acid-Designatoren, gefolgt von einem Sternchen (*) anzugeben, dass die R&uuml;ckst&auml;nde in den anderen Untereinheit des der Dimer stammen)) und drei gebundenen Wassermolek&uuml;le. Zwei katalytisch inaktive Varianten des AtDAP-AT entstanden &uuml;ber Site-verwiesene Mutagenese von der aktiven Site-Lysin (K270N und K270Q). Die Strukturen dieser Varianten erlaubt die Beobachtung der ungek&uuml;rzten externe Aldimines von PLP mit L-Glutamat und LL-DAP in der aktiven Site und offenbarte Unterschiede in den Verdrehwinkel &uuml;ber die PLP-Substrat-Bond. Schlie&szlig;lich ergab eine Apo-AtDAP-AT-Struktur fehlen, PLP Informationen &uuml;ber Konformationsver&auml;nderungen induziert durch PLP-Bindung und Substrat-Inkrafttreten der aktiven Site.

Mechanismus der Substrat-Anerkennung und PLP-induzierte Konformationsver&auml;nderungen in LL-Diaminopimelate-Aminotransferase aus Arabidopsis Thaliana.

In &Uuml;bereinstimmung mit der Theorie des Krebs-Stammzellen (CSC) nur eine kleine Teilmenge der Krebszellen sind in der Lage, Tumoren zu bilden. Wir berichteten bereits, dass CD44 tumorigenic Zellen an Kopf und Hals Plattenepithelkarzinom Krebs (HNSCC) isoliert. Neuere Studien zeigen, dass die Aldehyd-Dehydrogenase (ALDH) Aktivit&auml;t spezifischeren Marker des CSCs darstellen kann.

Einzel-Marker-Identifizierung von Kopf und Hals Plattenepithelkarzinom Krebsstammzellen mit Aldehyd-Dehydrogenase.

In accord with the cancer stem cell (CSC) theory, only a small subset of cancer cells are capable of forming tumors. We previously reported that CD44 isolates tumorigenic cells from head and neck squamous cell cancer (HNSCC). Recent studies indicate that aldehyde dehydrogenase (ALDH) activity may represent a more specific marker of CSCs.

Single-marker identification of head and neck squamous cell carcinoma cancer stem cells with aldehyde dehydrogenase.

Bacteria and higher plants make l-lysine from diaminopimelic acid (DAP). In mammals l-lysine is an essential amino acid that must be acquired from the diet as the biosynthetic pathway is absent for this key constituent of proteins. Recently, ll-diaminopimelate aminotransferase (ll-DAP-AT), a pyridoxal-5'-phosphate (PLP)-dependent enzyme, was reported to catalyze a key step in the route to l-lysine in plants and Chlamydia. Specific inhibitors of this enzyme could thus potentially serve as herbicides or antibiotics that are non-toxic to mammals. In this work, 29,201 inhibitors were screened against ll-DAP-AT and the IC(50) values were determined for the top 46 compounds. An aryl hydrazide and rhodanine derivatives were further modified to generate 20 analogues that were also tested against ll-DAP-AT. These analogues provide additional structure-activity relationships (SAR) that are useful in guiding further design of inhibitors.

Exploration of inhibitors for diaminopimelate aminotransferase.

Bakterien und h&ouml;heren Pflanzen machen l-Lysin Diaminopimelins&auml;ure S&auml;ure (DAP). Bei S&auml;ugetieren l-Lysin ist eine essentielle Aminos&auml;ure, die aus der Nahrung erworben werden m&uuml;ssen, wie die biosynthetischen Pathway fehlt f&uuml;r diese wichtigen Bestandteil von Proteinen. Vor kurzem, ll-Diaminopimelate Aminotransferase (ll-DAP-AT), einem Pyridoxal-5&#39;-Phosphat (PLP)-abh&auml;ngige Enzym, wurde berichtet, dass einen wichtigen Schritt in der Route, l-Lysin in Pflanzen und Chlamydien zu katalysieren. Spezifische Inhibitoren dieses Enzyms als Herbizide oder Antibiotika, die nicht toxisch sind somit potentiell dienen k&ouml;nnte bis zu den S&auml;ugetieren. In dieser Arbeit 29.201-Inhibitoren wurden gegen ll-DAP-AT gezeigt und die IC (50) f&uuml;r die obersten 46 Verbindungen bestimmt waren. Ein Aryl Maleins&auml;urehydrazid und Rhodanine-Derivate wurden weiter modifiziert, um 20-Analoga zu generieren, die auch gegen ll-DAP-AT getestet wurden. Diese Analoga bieten zus&auml;tzliche Struktur-Aktivit&auml;ts-Beziehungen (SAR), die in der weiteren Gestaltung der Inhibitoren F&uuml;hrung n&uuml;tzlich sind.

Exploration von Inhibitoren f&uuml;r Diaminopimelate-Aminotransferase.

Neural crest cells (NCCs) are a remarkable, dynamic group of cells that travel long distances in the embryo to reach their target sites. They are responsible for the formation of craniofacial bones and cartilage, neurons and glia in the peripheral nervous system, and pigment cells. Live imaging of NCCs as they traverse the embryo has been critical to increasing our knowledge of their biology. NCCs exhibit multiple behaviors and communicate with each other and their environment along each step of their journey. Imaging combined with molecular manipulations has led to insights into the mechanisms controlling these behaviors. In this review, we highlight studies that have used live imaging to provide novel insight into NCC migration and discuss how continued use of such techniques can advance our understanding of NCC biology.

Control of neural crest cell behavior and migration: Insights from live imaging.

Neuralleistenzellen (nationalen Falschgeldzentren) sind eine bemerkenswerte, dynamische Gruppe von Zellen, die langen im Embryo Distanzen, ihre Ziel-Sites zu erreichen. Sie sind verantwortlich f&uuml;r die Bildung von kraniofazialen Knochen und Knorpel, Neuronen und Glia im peripheren Nervensystem und Pigmentzellen. Live Bildgebung der nationalen Falschgeldzentren hat wie den Embryo zu durchlaufen, erh&ouml;ht unser Wissen &uuml;ber ihre Biologie ge&auml;u&szlig;ert. Nationalen Falschgeldzentren zeigen mehrere Verhaltensweisen und kommunizieren miteinander und ihrer Umgebung entlang jedem Schritt ihrer Reise. Kombiniert mit Manipulationen der molekularen Bildgebung f&uuml;hrte zu Einblicke in die Mechanismen, die diese Verhaltensweisen zu steuern. In diesem Bericht, markieren wir Studien, die verwendet haben live imaging um einen neuartigen Einblick in NCC-Migration und diskutieren wie fortgesetzte Verwendung solcher Techniken kann unser Verst&auml;ndnis der Biologie der NCC voranbringen.

Kontrolle der Neuralleiste Zelle Verhalten und Migration: Einblicke von live-Imaging.

Accurate neural crest cell (NCC) migration requires tight control of cell adhesions, cytoskeletal dynamics and cell motility. Cadherins and RhoGTPases are critical molecular players that regulate adhesions and motility during initial delamination of NCCs from the neuroepithelium. Recent studies have revealed multiple functions for these molecules and suggest that a precise balance of their activity is crucial. RhoGTPase appears to regulate both cell adhesions and protrusive forces during NCC delamination. Increasing evidence shows that cadherins are multi-functional proteins with novel, adhesion-independent signaling functions that control NCC motility during both delamination and migration. These functions are often regulated by specific proteolytic cleavage of cadherins. After NCC delamination, planar cell polarity signaling acts via RhoGTPases to control NCC protrusions and migration direction.

Regulation of cell adhesions and motility during initiation of neural crest migration.

Genaue Neuralleiste Zellmigration (NCC) erfordert strenge Kontrolle der Zelle Adh&auml;sionen, Zytoskelett Dynamik und Zelle Motilit&auml;t. Cadherine und RhoGTPases sind wichtige Molekulare Spieler, die Adh&auml;sionen und Motilit&auml;t w&auml;hrend der anf&auml;nglichen Delamination des nationalen Falschgeldzentren aus den Neuroepithelium zu regulieren. Neuere Studien haben ergeben, mehrere Funktionen f&uuml;r diese Molek&uuml;le und legen nahe, dass ein ausgewogenes Verh&auml;ltnis von ihrer T&auml;tigkeit entscheidend ist. RhoGTPase scheint Zelle Adh&auml;sionen und protrusive Kr&auml;fte w&auml;hrend NCC Delamination zu regulieren. Zunehmende Beweise zeigt, dass Cadherine multifunktionelle Proteine mit Roman, Haftung-unabh&auml;ngige Signalling-Funktionen, die NCC-Motilit&auml;t bei Delamination und Migration zu kontrollieren. Diese Funktionen werden oft durch bestimmte proteolytische Spaltung der Cadherine geregelt. Nach NCC Delamination fungiert die planare Zelle Polarit&auml;t Signalisierung &uuml;ber RhoGTPases Steuerelement NCC Vorspr&uuml;nge und Migration Richtung.

Regelung der Zelle Adh&auml;sionen und Motilit&auml;t w&auml;hrend der Einleitung der Neuralleiste Migration.

Die Krebs-Stammzellen (CSC)-Theorie stellt fest, dass eine Subpopulation von Krebszellen, die Krebsstammzellen erneuern k&ouml;nnen und sind verantwortlich f&uuml;r Tumorwachstum. Fr&uuml;here Studien haben Zellen in der Lage, Efflux Hoechst 33342 Farbstoff als die Seite Bev&ouml;lkerung (SP) identifiziert. SP haben Zellen und CSCs viele Gemeinsamkeiten, was darauf hindeutet, dass der SP isoliert von malignen Tumoren CSCs enth&auml;lt.

Kopf und Hals Krebsstammzellen: Seite Bev&ouml;lkerung.

The cancer stem cell (CSC) theory concludes that a subpopulation of cancer cells, the cancer stem cells, can self-renew and are responsible for tumor growth. Previous studies have identified cells able to efflux Hoechst 33342 dye as the side population (SP). SP cells and CSCs share many characteristics, suggesting the SP isolated from malignant tumors contains CSCs.

Head and neck cancer stem cells: the side population.

We have previously reported the structures of the native holo and substrate-bound forms of LL-diaminopimelate aminotransferase from Arabidopsis thaliana (AtDAP-AT). Here, we report the crystal and molecular structures of the LL-diaminopimelate aminotransferase from Chlamydia trachomatis (CtDAP-AT) in the apo-form and the pyridoxal-5'-phosphate-bound form. The molecular structure of CtDAP-AT shows that its overall fold is essentially identical with that of AtDAP-AT except that CtDAP-AT adopts an "open" conformation as opposed to the "closed" conformation of AtDAP-AT. Although AtDAP-AT and CtDAP-AT are approximately 40% identical in their primary sequence, they have major differences in their substrate specificities; AtDAP-AT is highly specific for LL-DAP, whereas CtDAP-AT accepts a wider range of substrates. Since all of the residues involved in substrate recognition are highly conserved between AtDAP-AT and CtDAP-AT, we propose that differences in flexibility of the loops lining the active-site region between the two enzymes likely account for the differences in substrate specificity.

The structure of LL-diaminopimelate aminotransferase from Chlamydia trachomatis: implications for its broad substrate specificity.

Wir haben zuvor die Strukturen des systemeigenen Holo und Substrat gebundene Formen der LL-Diaminopimelate-Aminotransferase von Arabidopsis Thaliana (AtDAP-AT) berichtet. Hier berichten wir den Kristall und die molekularen Strukturen der LL-Diaminopimelate-Aminotransferase von Chlamydia Trachomatis (CtDAP-AT) in der Apo-Form und Form Pyridoxal-5&#39;-Phosphat gebunden. Die molekulare Struktur von CtDAP-AT zeigt, dass seine gesamte Falte im Wesentlichen identisch mit der AtDAP-AT ist, au&szlig;er, dass CtDAP-AT eine &quot;offene&quot; Konformation im Gegensatz zu den &quot;geschlossenen&quot; Konformation AtDAP-at annimmt. Obwohl AtDAP-AT und CtDAP-AT ca. 40 % in ihrer prim&auml;ren Sequenz identisch sind, haben sie gro&szlig;e Unterschiede in ihrer Substrat Besonderheiten; AtDAP-AT ist sehr spezifisch f&uuml;r LL-DAP, w&auml;hrend CtDAP-AT ein breiteres Spektrum von Substraten akzeptiert. Da alle R&uuml;ckst&auml;nde im Substrat Anerkennung zwischen AtDAP-AT und CtDAP-AT stark konserviert sind, schlagen wir vor, dass die Unterschiede beim Flexibilit&auml;t der Auskleidung der aktiven-Site-Region zwischen den beiden Enzyme wahrscheinlich entfallen die Unterschiede in der Substratspezifit&auml;t Schleifen.

Article	Year
Aryl annulation of cyclic ketones via a magnesium carbometalation-6-pi- electrocyclization protocol. Organic letters\| PubMed ID: 15727436	2005
Acetylenic allenophanes: an asymmetric synthesis of a Bis(alleno)-bis(butadiynyl)-meta-cyclophane. Angewandte Chemie (International ed. in English)\| PubMed ID: 15906404	2005
Crystal structure of LL-diaminopimelate aminotransferase from Arabidopsis thaliana: a recently discovered enzyme in the biosynthesis of L-lysine by plants and Chlamydia. Journal of molecular biology\| PubMed ID: 17583737	2007
Rho-kinase and myosin II affect dynamic neural crest cell behaviors during epithelial to mesenchymal transition in vivo. Developmental biology\| PubMed ID: 18926812	2008
Mechanism of substrate recognition and PLP-induced conformational changes in LL-diaminopimelate aminotransferase from Arabidopsis thaliana. Journal of molecular biology\| PubMed ID: 18952095	2008
Single-marker identification of head and neck squamous cell carcinoma cancer stem cells with aldehyde dehydrogenase. Head & neck\| PubMed ID: 20073073	2010
Exploration of inhibitors for diaminopimelate aminotransferase. Bioorganic & medicinal chemistry\| PubMed ID: 20185317	2010
Control of neural crest cell behavior and migration: Insights from live imaging. Cell adhesion & migration\| PubMed ID: 20671421	2010
Regulation of cell adhesions and motility during initiation of neural crest migration. Current opinion in neurobiology\| PubMed ID: 20970990	2011
Head and neck cancer stem cells: the side population. The Laryngoscope\| PubMed ID: 21344428	2011
The structure of LL-diaminopimelate aminotransferase from Chlamydia trachomatis: implications for its broad substrate specificity. Journal of molecular biology\| PubMed ID: 21722650	2011

Matthew Clay

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