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Derivation of Thymic Lymphoma T-cell Lines from Atm-/- and p53-/- Mice

Established cell lines are a critical research tool that can reduce the use of laboratory animals in research. Certain strains of genetically modified ...

A membrane-associated, subtilisin-like, serine protease activity was found in both pathogenic and non-pathogenic strains of Brachyspira species in a previous study, but the biochemical properties of the enzyme were not investigated. The purpose of the present study was to characterize further the biochemical properties, including substrate specificity, of the membrane-associated protease of Brachyspira pilosicoli isolated from humans with intestinal disorders. Protease activity of detergent-enriched membrane protein extracts of B. pilosicoli was assessed using fluorescent dye-labelled synthetic peptides as substrates and determination of electrophoretic mobility of cleavage products in agarose gels. Each activity was further confirmed with class-specific protease inhibitors and thermal denaturation. The presence of a hydrophilic membrane-associated thermolabile serine endopeptidase with specificity for Leu was confirmed. Two additional hydrophilic membrane-associated thermostable proteolytic activities were identified, one with a putative Ala specificity, and one a carboxypeptidase. Taken together, these data suggest that, in addition to a previously described membrane-associated subtilisin-like serine protease, the membrane of B. pilosicoli contains proteins with at least two other proteolytic activities.

Biochemical properties of membrane-associated proteases of Brachyspira pilosicoli isolated from humans with intestinal disorders.

Biochemische Eigenschaften von Membran-assoziierten Proteasen Brachyspira pilosicoli isoliert von Menschen mit Darmerkrankungen.

It has been suggested that canine intestinal spirochaetes consist of Brachyspira pilosicoli and a group of strains that has been provisionally designated 'Brachyspira canis'. The purpose of the present study was to compare 22 spirochaete isolates that were obtained from intestinal specimens of dogs in Sweden (n = 12), Norway (n = 4), the United States (n = 3), Australia (n = 2) and Germany (n = 1) with type and reference strains, as well as field isolates, of Brachyspira species by five biochemical tests and determination of almost-complete 16S rDNA sequences. In an evolutionary tree derived from 16S rDNA sequences, the canine isolates grouped into three clusters. One cluster included the type strain of porcine B. pilosicoli, whereas a second larger cluster, which was monophyletic, contained a canine strain that was identified previously as 'B. canis'. The third cluster consisted of three canine isolates of Scandinavian origin, which grouped together with the type strain of the species Brachyspira alvinipulli (pathogenic to chicken). These three genotypes, which were identified on the basis of 16S rDNA sequences, corresponded to four phenotypic groups based on biochemical testing. Two biochemical tests, hippurate hydrolysis and alpha-galactosidase production, were sufficient for rapid identification of each canine cluster.

Identification of three clusters of canine intestinal spirochaetes by biochemical and 16S rDNA sequence analysis.

Identifizierung von drei Gruppen von Hunde-Darm-Spiroch&#xE4;ten durch biochemische und 16S-rDNA-Sequenzanalyse.

An association between certain Campylobacter species and enterocolitis in humans and nonhuman primates is well established, but the association between cytolethal distending toxin and disease is incompletely understood. The purpose of the present study was to examine Campylobacter species isolated from captive conventionally raised macaque monkeys for the presence of the cdtB gene and for cytolethal distending toxin activity. The identity of each isolate was confirmed on the basis of phenotypic and genotypic analyses. The presence of cytolethal distending toxin was confirmed on the basis of characteristic morphological changes in HeLa cells incubated with filter-sterilized whole-cell lysates of reference and monkey Campylobacter isolates and examinations by light microscopy, confocal microscopy, and flow cytometry. Although cdtB gene sequences were found in both Campylobacter jejuni and Campylobacter coli, the production of cytolethal distending toxin correlated positively (P < 0.0001) only with C. jejuni. We concluded that cytolethal distending toxin activity is a characteristic of C. jejuni. Our C. jejuni cdtB gene-specific PCR assay might be of assistance for differentiating toxigenic C. jejuni from C. coli in clinical laboratories.

Characterization of cytolethal distending toxin of campylobacter species isolated from captive macaque monkeys.

Charakterisierung von zytoletalen ausbreitender Toxin von Campylobacter-Spezies aus gefangenen Rhesusaffen isoliert.

Penicillin-binding proteins (PBPs) of slightly different molecular masses (94, 62 or 68, 42 or 50, 25, and 22 kDa) were identified in one human and two porcine Brachyspira pilosicoli strains. Identification of PBPs of B. pilosicoli provides a basis for characterization of the genes encoding these proteins among pathogenic intestinal spirochetes of humans and animals.

Penicillin-binding proteins in the pathogenic intestinal spirochete Brachyspira pilosicoli.

Penicillin-bindende Proteine &#x200B;&#x200B;in der pathogenen intestinalen Spiroch&#xE4;ten Brachyspira pilosicoli.

The cytolethal distending toxin B (CdtB) of the mouse pathogen Helicobacter hepaticus has cation binding and DNA catalysis residues in common with members of the mammalian deoxyribonuclease I (DNase I) family. The purpose of the present study was to characterize CdtB nuclease. To establish optimal digestion conditions and to evaluate co-factor requirements, a novel and sensitive fluorometric assay that quantitatively determines double stranded DNA digestion was developed. Although the Ca2+- and Mg2+-dependence and neutral properties of CdtB were similar to DNase I, hydrolysis of DNA by CdtB was approximately 100-fold less active than DNase I and was considerably more resistant to inhibition by ZnCl2 and G-actin.

The cytolethal distending toxin B sub-unit of Helicobacter hepaticus is a Ca2+- and Mg2+-dependent neutral nuclease.

Die Cytolethal ausdehnend Toxin B (CdtB) von der Maus-Erreger Helicobacter Hepaticus hat kation Bindung und DNA-Katalyse-R&uuml;ckst&auml;nde gemeinsam mit Mitgliedern der S&auml;ugetier-Desoxyribonuklease ich (DNase I) Familie. Ziel der vorliegenden Studie war CdtB Nuklease charakterisieren. Einf&uuml;hrung Voraussetzungen f&uuml;r eine optimale Verdauung und Co-factor Anforderungen zu bewerten, wurde eine neuartige und sensible fluorometrischen Assays, die quantitativ, doppelte angeschwemmte DNA Verdauung bestimmt entwickelt. Obwohl die Ca2 +- und Mg2 +-Abh&auml;ngigkeit und neutrale Eigenschaften des CdtB waren &auml;hnlich DNase Hydrolyse von DNA durch CdtB war etwa 100-fold weniger aktiv als DNase ich und war wesentlich widerstandsf&auml;higer gegen Hemmung von ZnCl2 und G-Actin.

Die Cytolethal ausdehnend Toxin B-Untereinheit des Helicobacter Hepaticus ist ein Ca2 +- und Mg2 +-abh&auml;ngigen neutralen Nuklease.

To investigate the relative pathogenicity of Candida albicans treated with subinhibitory concentrations of fluconazole in a mouse model of disseminated candidiasis. Previous studies indicate that these cells secrete 10 times more farnesol than do untreated cells. In our usage, subinhibitory means a concentration which causes a prominent decrease in turbidity but still allows some cell growth.

Enhanced pathogenicity of Candida albicans pre-treated with subinhibitory concentrations of fluconazole in a mouse model of disseminated candidiasis.

Die relative Pathogenit&auml;t von Candida Albicans zu untersuchen, die mit subinhibitory Konzentrationen von Fluconazol in einem Mausmodell der disseminierte Candidiasis behandelt werden. Bisherige Untersuchungen zeigen, dass diese Zellen 10 mal mehr Farnesol sezernieren als unbehandelte Zellen zu tun. Subinhibitory bedeutet in unseren Einsatz Zusammenschl&uuml;sse, die, verursacht einen bedeutenden R&uuml;ckgang der Tr&uuml;bung l&auml;sst aber dennoch einige Zellwachstum.

Verbesserte Pathogenit&auml;t von Candida Albicans Filtrationsanlagen mit subinhibitory Konzentrationen von Fluconazol in einem Mausmodell der disseminierte Candidiasis.

This work extends our previous observation that the fungus Candida albicans secretes micromolar levels of farnesol and that accumulation of farnesol in vitro prevents the yeast-to-mycelium conversion in a quorum-sensing manner. What does farnesol do in vivo? The purpose of this study was to determine the role of farnesol during infection with a well-established mouse model of systemic candidiasis with C. albicans A72 administered by tail vein injection. This question was addressed by altering both endogenous and exogenous farnesol. For endogenous farnesol, we created a knockout mutation in DPP3, the gene encoding a phosphatase which converts farnesyl pyrophosphate to farnesol. This mutant (KWN2) produced six times less farnesol and was ca. 4.2 times less pathogenic than its SN152 parent. The strain with DPP3 reconstituted (KWN4) regained both its farnesol production levels and pathogenicity. These mutants (KWN1 to KWN4) retained their full dimorphic capability. With regard to exogenous farnesol, farnesol was administered either intraperitoneally (i.p.) or orally in the drinking water. Mice receiving C. albicans intravenously and farnesol (20 mM) orally had enhanced mortality (P < 0.03). Similarly, mice (n = 40) injected with 1.0 ml of 20 mM farnesol i.p. had enhanced mortality (P < 0.03), and the onset of mortality was 30 h sooner than for mice which received a control injection without farnesol. The effect of i.p. farnesol was more pronounced (P < 0.04) when mice were inoculated with a sublethal dose of C. albicans. These mice started to die 4 days earlier, and the percent survival on day 6 postinoculation (p.i.) was five times lower than for mice receiving C. albicans with control i.p. injections. In all experiments, mice administered farnesol alone or Tween 80 alone remained normal throughout a 14-day observation period. Finally, beginning at 12 h p.i., higher numbers of C. albicans cells were detected in kidneys from mice receiving i.p. farnesol than in those from mice receiving control i.p. injections. Thus, reduced endogenous farnesol decreased virulence, while providing exogenous farnesol increased virulence. Taken together, these data suggest that farnesol may play a role in disease pathogenesis, either directly or indirectly, and thus may represent a newly identified virulence factor.

Effect of farnesol on a mouse model of systemic candidiasis, determined by use of a DPP3 knockout mutant of Candida albicans.

Diese Arbeit erweitert unsere vorherige Beobachtung, dass der Pilz Candida Albicans micromolar Ebenen der Farnesol sondert und Anh&auml;ufung von Farnesol in-vitro-Hefe-Myzel-Umwandlung in eine Quorum-sensing-Weise verhindert. Was bedeutet Farnesol tun in-vivo? Der Zweck dieser Studie war die Rolle des Farnesol w&auml;hrend der Infektion mit einem etablierten Mausmodell der systemischen Candidose mit C. Albicans festzustellen A72 durch Schwanz Vene Injektion verabreicht. Diese Frage wurde durch die Ver&auml;nderung sowohl endogene und exogene Farnesol gerichtet. F&uuml;r endogene Farnesol haben wir eine k.o.-Mutation in DPP3, gen, das eine Phosphatase, Farnesyl Diphosphate in Farnesol konvertiert. Diese Mutante (KWN2) produziert sechsmal weniger Farnesol und war ca. 4,2 mal weniger pathogenen als &uuml;bergeordneten SN152. Die Belastung mit DPP3 rekonstituiert (KWN4) wiedergewonnen seiner Farnesol Produktionsniveau und die Pathogenit&auml;t. Diese Mutanten (KWN1, KWN4) behielt ihre volle dimorphe F&auml;higkeit. Im Hinblick auf exogene Farnesol, Farnesol war entweder intraperitoneal verabreicht (i.p.) oder m&uuml;ndlich im Trinkwasser. M&auml;use, die intraven&ouml;s empfangen von C. Albicans und Farnesol (20 mM) m&uuml;ndlich hatte erh&ouml;hte Sterblichkeit (P &lt; 0,03). In &auml;hnlicher Weise M&auml;use (n = 40) injiziert mit 1,0 ml 20 mM Farnesol i.p. verbesserten hatten Sterblichkeit (P &lt; 0,03), und der Beginn der Sterblichkeit war 30 h fr&uuml;her als bei M&auml;usen, die ein Steuerelement Injektion ohne Farnesol. Die Wirkung von i.p. Farnesol war ausgepr&auml;gter (P &lt; 0,04) Wenn M&auml;use mit einer subletale Dosis von C. Albicans geimpft wurden. Diese M&auml;use begonnen, die 4 Tage zuvor, und das prozentuale &uuml;berleben am Tag f&uuml;nfmal niedriger als bei M&auml;usen empfangen von C. Albicans mit Kontrolle i.p.-Injektionen war 6 Postinoculation (p.i.). Alle Experimente M&auml;usen verabreicht Farnesol allein oder Tween 80 allein blieb &uuml;ber einen Beobachtungszeitraum von 14 Tagen normal. Schlie&szlig;lich wurden ab 12 h p.i., h&ouml;here Zahlen von C. Albicans Zellen bei Nieren von M&auml;usen erhalten i.p. Farnesol als in jenen von M&auml;usen erhalten Kontrolle i.p.-Injektionen festgestellt. So sank die reduzierte endogene Farnesol Virulenz, bei gleichzeitiger exogene Farnesol erh&ouml;hte Virulenz. Zusammengenommen empfehlen diese Daten Farnesol kann eine Rolle in der Pathogenese der Krankheit, die entweder direkt oder indirekt, und somit k&ouml;nnen vertreten eine neu identifizierte Virulenzfaktoren.

Auswirkungen von Farnesol auf einem Mausmodell der systemische Candidiasis, bestimmt durch Verwendung von DPP3 k.o. Mutanten von Candida Albicans.

Candida Albicans, ein dimorpher Pilz, bestehend aus Hefe und mycelial Formen, ist die h&auml;ufigste menschliche Pilz-Erreger. TH1-Zytokine wie Interleukin-2 (Il-2), Gamma-Interferon (IFN-Gamma) und Tumor-Nekrose-Faktor-Alpha (TNF-Alpha), die durch Makrophagen IL-12 verursacht werden, sind entscheidend f&uuml;r Widerstand gegen systemische Candidiasis, w&auml;hrend Th2-Zytokine wie IL-4 und IL-5 weniger kritisch sind. Farnesol ist ein Quorum-sensing-Molek&uuml;l von C. Albicans, die steuert die Bildung von Mycel sondern auch ein Virulenzfaktoren produziert. Um festzustellen, ob Farnesol die Virulenz von C. Albicans erh&ouml;ht durch Modulation der Produktion von Th1 und Th2 Zytokinen, wurden M&auml;use mit Farnesol vor der intraven&ouml;sen Infektion mit einer subletale Dosis von C. Albicans Farnesol erzeugenden vorbehandelt. Herstellung von Il, IL-4, IL-5, TNF-Alpha, IFN-Gamma und IL-12 war von Perlen-Array Durchflusszytometrie und Enzym-Immunassay ausgewertet. M&auml;use stellte einer H&ouml;he TNF-Alpha-Serumspiegel bei 48 h und einer H&ouml;he in IFN-Gamma und IL-12 Ebenen bei 6 bis 12 h nach der Infektion mit C. Albicans. Vorbehandlung mit Farnesol reduziert deutlich die H&ouml;he von sowohl IFN-Gamma und IL-12, aber nicht TNF-Alpha. Im Gegensatz dazu ausgestellt M&auml;use vorbehandelt mit Farnesol eine unerwartete Erhebung im IL-5 Ebenen. Um festzustellen, ob Farnesol eine direkte Wirkung auf Makrophagen Produktion von IL-12 hat, waren die peritoneale Makrophagen mit Farnesol vor der Stimulation mit IFN-Gamma plus Lipopolysaccharid (LPS) vorbehandelt. Farnesol gehemmt Produktion von IL-12 p40 und p70 von IFN-Gamma/LPS-stimuliert Makrophagen. Daher ist die Rolle des Farnesol in systemische Candidose wahrscheinlich wegen seiner F&auml;higkeit der kritischen Th1-Zytokine IFN-Gamma und IL-12 zu hemmen und vielleicht eine Th2-Zytokin, IL-5.

Exogene Farnesol &uuml;berschneidet sich mit dem normalen Verlauf w&auml;hrend Candidose in einem Mausmodell Cytokine Ausdruck.

Candida albicans, a dimorphic fungus composed of yeast and mycelial forms, is the most common human fungal pathogen. Th1 cytokines such as interleukin-2 (IL-2), gamma interferon (IFN-gamma), and tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha), which are induced by macrophage IL-12, are critical to resistance against systemic candidiasis, while Th2 cytokines such as IL-4 and IL-5 are less critical. Farnesol is a quorum-sensing molecule produced by C. albicans that controls the formation of mycelia but is also a virulence factor. To determine whether farnesol enhances the virulence of C. albicans by modulating the production of Th1 and Th2 cytokines, mice were pretreated with farnesol prior to intravenous infection with a sublethal dose of farnesol-producing C. albicans. Production of IL-2, IL-4, IL-5, TNF-alpha, IFN-gamma, and IL-12 was evaluated by bead-array flow cytometry and enzyme-linked immunosorbent assay. Mice exhibited an elevation in serum TNF-alpha levels at 48 h and an elevation in IFN-gamma and IL-12 levels at 6 to 12 h after infection with C. albicans. Pretreatment with farnesol significantly reduced the elevation of both IFN-gamma and IL-12 but not TNF-alpha. In contrast, mice pretreated with farnesol exhibited an unexpected elevation in IL-5 levels. To determine whether farnesol has a direct effect on macrophage production of IL-12, peritoneal macrophages were pretreated with farnesol prior to stimulation with IFN-gamma plus lipopolysaccharide (LPS). Farnesol inhibited production of both IL-12 p40 and p70 from IFN-gamma/LPS-stimulated macrophages. Therefore, the role of farnesol in systemic candidiasis is likely due to its ability to inhibit the critical Th1 cytokines IFN-gamma and IL-12 and perhaps to enhance a Th2 cytokine, IL-5.

Exogenous farnesol interferes with the normal progression of cytokine expression during candidiasis in a mouse model.

Helicobacter hepaticus is a gram-negative, spiral-shaped microaerophilic bacterium associated with chronic intestinal infection leading to hepatitis and colonic and hepatic carcinomas in susceptible strains of mice. In the closely related human pathogen Helicobacter pylori, L-proline is a preferred respiratory substrate and is found at significantly high levels in the gastric juice of infected patients. A previous study of the proline catabolic PutA flavoenzymes from H. pylori and H. hepaticus revealed that Helicobacter PutA generates reactive oxygen species during proline oxidation by transferring electrons from reduced flavin to molecular oxygen. We further explored the preference for proline as a respiratory substrate and the potential impact of proline metabolism on the redox environment in Helicobacter species during host infection by disrupting the putA gene in H. hepaticus. The resulting putA knockout mutant strain was characterized by oxidative stress analysis and mouse infection studies. The putA mutant strain of H. hepaticus exhibited increased proline levels and resistance to oxidative stress relative to that of the wild-type strain, consistent with proline's role as an antioxidant. The significant increase in stress resistance was attributed to higher proline content, as no upregulation of antioxidant genes was observed for the putA mutant strain. The wild-type and putA mutant H. hepaticus strains displayed similar levels of infection in mice, but in mice challenged with the putA mutant strain, significantly reduced inflammation was observed, suggesting a role for proline metabolism in H. hepaticus pathogenicity in vivo.

Characterization of a Helicobacter hepaticus putA mutant strain in host colonization and oxidative stress.

Helicobacter Hepaticus ist ein Gram-negative, spiralf&ouml;rmige mikroaerophiles Bakterium chronische Darm-Infektion, Hepatitis und Kolon und hepatische Karzinome in anf&auml;lligen Sorten von M&auml;usen zugeordnet. In den eng verwandten menschlicher Erreger Helicobacter Pylori L-Prolin ist eine bevorzugte Atemwege Substrat und findet sich in der Magensaft infizierten Patienten signifikant hoch. Eine fr&uuml;here Studie &uuml;ber das Prolin katabolischen PutA Flavoenzymes von H. Pylori und H. Hepaticus ergab, dass Helicobacter PutA reaktive Sauerstoffspezies w&auml;hrend Prolin Oxydation generiert, indem Elektronen von reduzierten Flavin auf molekularen Sauerstoff &uuml;bertragen. Wir weiter untersucht die Vorliebe f&uuml;r Prolin als respiratorische Substrat und die m&ouml;glichen Auswirkungen der Prolin-Stoffwechsel auf die Redox-Umwelt bei Helicobacter-Spezies w&auml;hrend der Host-Infektion durch st&ouml;ren das PutA-gen in H. Hepaticus. Der resultierende PutA k.o.-mutant-Stamm war gepr&auml;gt durch oxidativen Stress-Analyse und Maus-Infektion-Studien. Die PutA-mutant-Stamm von H. Hepaticus stellte erh&ouml;hte Prolin Ebenen und Resistenz gegen oxidativen Stress im Verh&auml;ltnis zu dem der Wildtyp-Stamm, mit Prolin die Rolle als Antioxidans. Der deutliche Anstieg der Stressresistenz war h&ouml;heren Prolin-Gehalt, zugeschrieben, da keine Hochregulation der Antioxidans-Gene f&uuml;r die PutA-mutant-Belastung beobachtet wurde. Der Wildtyp und PutA mutant H. Hepaticus St&auml;mme angezeigt &auml;hnliche Niveaus der Infektion bei M&auml;usen, aber M&auml;use mit der PutA-mutant-Belastung in Frage gestellt, deutlich verringerte Entz&uuml;ndung wurde beobachtet, was auf eine Rolle f&uuml;r Prolin-Stoffwechsel in H. Hepaticus Pathogenit&auml;t in-vivo.

Charakterisierung von Helicobacter Hepaticus PutA mutant Belastung in Host Kolonisation und oxidativen Stress.

The small intestine is an important site of infection for many enteric bacterial pathogens, and murine models, including the streptomycin-treated mouse model of infection, are frequently used to study these infections. The environment of the mouse small intestine and the microbiota with which enteric pathogens are likely to interact, however, have not been well described. Therefore, we compared the microbiota and the concentrations of short-chain fatty acids (SCFAs) present in the ileum and cecum of streptomycin-treated mice and untreated controls. We found that the microbiota in the ileum of untreated mice differed greatly from that of the cecum of the same mice, primarily among families of the phylum Firmicutes. Upon treatment with streptomycin, substantial changes in the microbial composition occurred, with a marked loss of population complexity. Characterization of the metabolic products of the microbiota, the SCFAs, showed that formate was present in the ileum but low or not detectable in the cecum while butyrate was present in the cecum but not the ileum. Treatment with streptomycin altered the SCFAs in the cecum, significantly decreasing the concentration of acetate, propionate, and butyrate. In this work, we also characterized the pathology of Salmonella infection in the ileum. Infection of streptomycin-treated mice with Salmonella was characterized by a significant increase in the relative and absolute levels of the pathogen and was associated with more severe ileal inflammation and pathology. Together these results provide a better understanding of the ileal environment in the mouse and the changes that occur upon streptomycin treatment.

Perturbation of the small intestine microbial ecology by streptomycin alters pathology in a Salmonella enterica serovar typhimurium murine model of infection.

Der D&uuml;nndarm ist ein wichtiger Standort der Infektion f&uuml;r viele enterischen bakteriellen Erreger und murinen Modelle, einschlie&szlig;lich Streptomyzin-behandelten Mausmodell der Infektion, werden h&auml;ufig verwendet, um diese Infektionen zu studieren. Die Umgebung des D&uuml;nndarms Maus und die Microbiota mit dem enterischen Krankheitserreger interagieren, d&uuml;rften jedoch wurden nicht gut beschrieben. Daher verglichen wir die Microbiota und die Konzentration von kurzkettigen Fetts&auml;uren (SCFAs) im Ileum und Blinddarm Streptomyzin-behandelten M&auml;usen und unbehandelten Kontrollen. Wir fanden, dass die Microbiota in das Ileum von unbehandelten M&auml;usen erheblich von derjenigen der Blinddarm der gleichen M&auml;use, vor allem bei Familien von der Stamm Firmicutes unterschieden sich. Nach Behandlung mit Streptomycin auftrat wesentliche &Auml;nderungen in der mikrobiellen Zusammensetzung, mit einem deutlichen Verlust der Bev&ouml;lkerung Komplexit&auml;t. Charakterisierung der Stoffwechselprodukte von Microbiota, die SCFAs zeigten, dass Formiat im Ileum vorhanden aber gering oder nicht nachweisbar in den Blinddarm w&auml;hrend Butyrat in den Blinddarm, aber nicht das Ileum war. Behandlung mit Streptomycin ver&auml;ndert die SCFAs in den Blinddarm, erheblich verringert die Konzentration von Acetat, propionat und Butyrat. In dieser Arbeit gekennzeichnet wir auch die Pathologie der Salmonellen-Infektion im Ileum. Infektion von Streptomycin-behandelten M&auml;usen mit Salmonellen zeichnete sich durch einen deutlichen Anstieg der relativen und absoluten Niveaus des Erregers und schwerere Ileum Entz&uuml;ndung und Pathologie zugeordnet wurde. Zusammen bieten diese Ergebnisse, ein besseres Verst&auml;ndnis der Ileum Umwelt in die Maus und die &Auml;nderungen, die nach Streptomyzin Behandlung auftreten.

St&ouml;rung der D&uuml;nndarm Mikrobielle &Ouml;kologie von Streptomyzin &auml;ndert Pathologie in einem Salmonella Enterica Serovar Typhimurium murinen Modell der Infektion.

Helicobacter hepaticus, the prototype for enterohepatic Helicobacter species, colonizes the lower intestinal and hepatobiliary tracts of mice and causes typhlocolitis, hepatitis, and hepatocellular carcinoma in susceptible mouse strains. Cytolethal distending toxin (CDT) is the only known virulence factor found in H. hepaticus. CDT of several Gram-negative bacteria is associated with double-stranded DNA breaks resulting in cell cycle arrest and death of a wide range of eukaryotic cells in vitro. We previously observed H. hepaticus CDT (HhCDT) mediated apoptosis in INT407 cells. However, the exact mechanism for the induction of the apoptotic pathway by HhCDT is unknown. The objective of this study was to identify the apoptotic signaling pathway induced by HhCDT in INT407 cells.

Helicobacter hepaticus cytolethal distending toxin causes cell death in intestinal epithelial cells via mitochondrial apoptotic pathway.

Helicobacter Hepaticus, den Prototyp f&uuml;r enterohepatischen Helicobacter-Arten, kolonisiert der unteren Darm und hepatobili&auml;re Landstriche M&auml;use und Ursachen Typhlocolitis, Hepatitis und Hepatozellul&auml;res Karzinom in empf&auml;nglicher Maus-St&auml;mme. Cytolethal ausdehnend Toxin (CDT) ist die einzige bekannte Virulenzfaktoren in H. Hepaticus gefunden. CDT mehrere Gram-negativer Bakterien ist doppelstr&auml;ngige DNA Br&uuml;che Zellzyklus Verhaftung und Tod eines breiten Spektrums von eukaryotischen Zellen in vitro zugeordnet. Wir beobachteten vorher H. Hepaticus CDT (HhCDT) vermittelte Apoptose in INT407 Zellen. Der genaue Mechanismus f&uuml;r die Induktion von der Apoptotic Weg von HhCDT ist jedoch unbekannt. Das Ziel dieser Studie bestand darin die Apoptotic Signalisierung Weg durch HhCDT in den INT407 Zellen induziert.

Helicobacter Hepaticus Cytolethal ausdehnend Toxin verursacht Zelltod in intestinalen Epithelzellen &uuml;ber mitochondriale Apoptotic Bahn.

Cytolethal distending toxin (CDT) is a heterotrimeric AB-type genotoxin produced by several clinically important Gram-negative mucocutaneous bacterial pathogens. Irrespective of the bacterial species of origin, CDT causes characteristic and irreversible cell cycle arrest and apoptosis in a broad range of cultured mammalian cell lineages. The active subunit CdtB has structural homology with the phosphodiesterase family of enzymes including mammalian DNase I, and alone is necessary and sufficient to account for cellular toxicity. Indeed, mammalian cells treated with CDT initiate a DNA damage response similar to that elicited by ionizing radiation-induced DNA double strand breaks resulting in cell cycle arrest and apoptosis. The mechanism of CDT-induced apoptosis remains incompletely understood, but appears to involve both p53-dependent and -independent pathways. While epithelial, endothelial and fibroblast cell lines respond to CDT by undergoing arrest of cell cycle progression resulting in nuclear and cytoplasmic distension that precedes apoptotic cell death, cells of haematopoietic origin display rapid apoptosis following a brief period of cell cycle arrest. In this review, the ecology of pathogens producing CDT, the molecular biology of bacterial CDT and the molecular mechanisms of CDT-induced cytotoxicity are critically appraised. Understanding the contribution of a broadly conserved bacterial genotoxin that blocks progression of the mammalian cell cycle, ultimately causing cell death, should assist with elucidating disease mechanisms for these important pathogens.

Cytolethal distending toxin: a conserved bacterial genotoxin that blocks cell cycle progression, leading to apoptosis of a broad range of mammalian cell lineages.

Cytolethal ausdehnend Toxin (CDT) ist ein Heterotrimeres AB-Typ Genotoxin, produziert von mehreren klinisch wichtige Gramnegative mukokutane bakteriellen Krankheitserregern. Unabh&auml;ngig von der bakteriellen Spezies Ursprungs verursacht CDT Merkmal, irreversible Zellzyklus Verhaftungs- und Apoptosis in eine breite Palette von kultivierten S&auml;ugetier-Zellkultur-&Uuml;bertragungslinien. Die aktive Untereinheit CdtB hat strukturelle Homologie mit der Phosphodiesterase-Familie einschlie&szlig;lich S&auml;ugetieren DNase Enzyme, und allein ist notwendig und ausreichend, um zellul&auml;re Toxizit&auml;t zu ber&uuml;cksichtigen. In der Tat initiieren S&auml;ugetier-Zellen mit CDT behandelt eine DNA-Schaden-Antwort &auml;hnlich wie hervorgerufen durch ionisierende Strahlen-induzierte DNA Doppelstrang Pausen was Verhaftung Zellzyklus und Apoptose. Der Mechanismus der CDT-induzierten Apoptose bleibt unvollst&auml;ndig verstanden, aber scheint sowohl p53-abh&auml;ngige und -unabh&auml;ngige umfassen Wege. Weile epitheliale, Endothelzellen und Fibroblasten-Zelllinien reagieren auf CDT von einer Verhaftung von Zellzyklusprogression was zu nuklearen und zytoplasmatischen Dehnung, der Apoptotic Zellentod, Zellen des h&auml;matopoetischen Ursprungs Display nach eine kurze Phase der Zellzyklus Verhaftung rasche Apoptose vorausgeht. In diesem Bericht, die &Ouml;kologie der Krankheitserreger produzieren CDT, sind die Molekularbiologie der bakteriellen CRT und die molekularen Mechanismen der CDT-induzierte Zytotoxizit&auml;t kritisch beurteilt. Verst&auml;ndnis des Beitrags von einer weitgehend erhaltenen bakterielle Genotoxin, die Bl&ouml;cke Fortschreiten des S&auml;ugetier-Zelle Zyklus, schlie&szlig;lich verursachend Zelltod, mit elucidating Krankheitsmechanismen f&uuml;r diese wichtige Erreger unterst&uuml;tzen sollte.

Cytolethal ausdehnend Toxin: eine konservierte bakterielle Genotoxin, die Zellzyklusprogression zu Apoptosis eines breiten Spektrums von S&auml;ugetier-Zellkultur-&Uuml;bertragungslinien blockiert.

Neutrophils have recently been shown to release DNA-based extracellular traps that contribute to microbicidal killing and have also been implicated in autoimmunity. The role of neutrophil extracellular trap (NET) formation in the host response to nonbacterial pathogens has received much less attention. Here, we show that the protozoan pathogen Toxoplasma gondii elicits the production of NETs from human and mouse neutrophils. Tachyzoites of each of the three major parasite strain types were efficiently entrapped within NETs, resulting in decreased parasite viability. We also show that Toxoplasma activates a MEK-extracellular signal-regulated kinase (ERK) pathway in neutrophils and that the inhibition of this pathway leads to decreased NET formation. To determine if Toxoplasma induced NET formation in vivo, we employed a mouse intranasal infection model. We found that the administration of tachyzoites by this route induced a rapid tissue recruitment of neutrophils with evidence of extracellular DNA release. Taken together, these data indicate a role for NETs in the host innate response to protozoan infection. We propose that NET formation limits infection by direct microbicidal effects on Toxoplasma as well as by interfering with the ability of the parasite to invade target host cells.

Toxoplasma gondii Triggers Release of Human and Mouse Neutrophil Extracellular Traps.

Neutrophile haben k&uuml;rzlich gezeigt, DNA-basierte extrazellul&auml;re fallen zu ver&ouml;ffentlichen, die dazu beitragen, Mikrobizide t&ouml;ten und haben auch in Autoimmunit&auml;t verwickelt worden. Die Rolle des neutrophil extrazellul&auml;re Trap (NET)-Formation in der Host-Reaktion auf abakteriellen Krankheitserreger hat sehr viel weniger Aufmerksamkeit erhalten. Hier zeigen wir, dass die Protozoen Erreger Toxoplasma Gondii Herstellung von Netzen aus Mensch und Maus Neutrophilen entlockt. Tachyzoites jeder der drei wichtigsten Parasiten Belastung wurden effizient innerhalb von Netzen, was zu verminderten Parasit Lebensf&auml;higkeit gefangen. Wir zeigen auch, dass Toxoplasma MEK-extrazellul&auml;re Signal-regulierte Kinase (ERK) Weg in Neutrophilen aktiviert und die Hemmung von diesem Weg zu verringerter NET Bildung f&uuml;hrt. Um festzustellen, ob Toxoplasma in-vivo NET Bildung induziert, haben wir einem Mausmodell intranasale Infektion. Wir fanden, dass die Verwaltung des Tachyzoites durch diesen Weg eine schnelle Gewebe-Rekrutierung von Neutrophilen mit Beweis von extrazellul&auml;rer DNA-Release induziert. Zusammengenommen geben diese Daten eine Rolle f&uuml;r Netze in der Host-angeborene Reaktion auf Protozoen-Infektion. Wir schlagen NET Bildung Infektion durch direkten Mikrobizide Wirkungen auf Toxoplasma sowie durch Eingriffe in die F&auml;higkeit des Parasiten, Ziel Wirtszellen Eindringen beschr&auml;nkt.

Article	Year
Biochemical properties of membrane-associated proteases of Brachyspira pilosicoli isolated from humans with intestinal disorders. Journal of medical microbiology\| PubMed ID: 15017289	2004
Identification of three clusters of canine intestinal spirochaetes by biochemical and 16S rDNA sequence analysis. Journal of medical microbiology\| PubMed ID: 15017293	2004
Characterization of cytolethal distending toxin of campylobacter species isolated from captive macaque monkeys. Journal of clinical microbiology\| PubMed ID: 15695658	2005
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Perturbation of the small intestine microbial ecology by streptomycin alters pathology in a Salmonella enterica serovar typhimurium murine model of infection. Infection and immunity\| PubMed ID: 19433544	2009
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Cytolethal distending toxin: a conserved bacterial genotoxin that blocks cell cycle progression, leading to apoptosis of a broad range of mammalian cell lineages. Microbiology (Reading, England)\| PubMed ID: 21565933	2011
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Gerald Duhamel

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