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A High-throughput Automated Platform for the Development of Manufacturing Cell Lines for Protein Therapeutics

The fast-growing biopharmaceutical industry demands speedy development of highly efficient and reliable production systems to meet the increasing ...

Patients undergoing total anorectal reconstruction for anorectal atresia or following abdominoperineal resection of the rectum do not fare as well after an electrically stimulated gracilis neoanal sphincter as patients with incontinence alone. This retrospective study reports the outcome for the combination of a continent colonic conduit or antegrade continence enema procedure with an electrically stimulated gracilis neoanal sphincter in patients with atresia or following an abdominoperineal resection of the rectum as part of total anorectal reconstruction to overcome combined incontinence and evacuatory dysfunction.

The combination of electrically stimulated gracilis neoanal sphincter and continent colonic conduit: a step forward for total anorectal reconstruction?

Die Kombination von elektrisch stimulierten gracilis neoanal Schlie&#xDF;muskel und Kontinent Colon-Conduit: ein Schritt vorw&#xE4;rts f&#xFC;r insgesamt anorektale Rekonstruktion?

Phospholamban (PLB) is a critical regulator of Ca(2+) cycling in heart muscle cells, and its gene expression is markedly down-regulated by T(3). Nonetheless, little is known about the molecular mechanisms of T(3)-dependent gene silencing in cardiac muscle, and it remains unclear whether thyroid hormone receptors (TRs) directly bind at the PLB gene in vivo and facilitate transcriptional repression. To investigate the regulatory role of TRs in PLB transcription, we used a physiological murine heart muscle cell line (HL-1) that retains cardiac electrophysiological properties, expresses both TRalpha1 and TRbeta1 subtypes, and exhibits T(3)-dependent silencing of PLB expression. By performing RNA interference assays with HL-1 cells, we found that TRalpha1, but not TRbeta1, is essential for T(3)-dependent PLB gene repression. Interestingly, a PLB reporter gene containing only the core promoter sequences -156 to +64 displayed robust T(3)-dependent silencing in HL-1 cells, thus suggesting that transcriptional repression is facilitated by TRalpha1 via the PLB core promoter, a regulatory region highly conserved in mammals. Consistent with this notion, chromatin immunoprecipitation and in vitro binding assays show that TRalpha1 directly binds at the PLB core promoter region. Furthermore, addition of T(3) triggered alterations in covalent histone modifications at the PLB promoter that are associated with gene silencing, namely a pronounced decrease in both histone H3 acetylation and histone H3 lysine 4 methylation. Taken together, our data reveal that T(3)-dependent repression of PLB in cardiac myocytes is directly facilitated by TRalpha1 and involves the hormone-dependent recruitment of histone-modifying enzymes associated with transcriptional silencing.

Repression of cardiac phospholamban gene expression is mediated by thyroid hormone receptor-{alpha}1 and involves targeted covalent histone modifications.

Phospholamban (PLB) ist ein wichtiger Regulator der Ca(2+) Radfahren in Herzmuskelzellen und die Genexpression ist deutlich unten durch T(3) geregelt. Dennoch ist wenig bekannt &uuml;ber die molekularen Mechanismen der T 3-abh&auml;ngigen gen-silencing im Herzmuskel, und es bleibt unklar, ob Schilddr&uuml;senhormon-Rezeptoren (TRs) direkt am den PLB-gen in-vivo binden und transcriptional Repression erleichtern. Um die Rolle des TRs in PLB-Transkription zu untersuchen, haben wir eine physiologische murinen Herz Muskel Zelllinie (HL-1), die kardiale elektrophysiologische Eigenschaften beh&auml;lt, dr&uuml;ckt sowohl TRalpha1 als auch TRbeta1-Subtypen und Exponate T 3-abh&auml;ngige Unterdr&uuml;ckender PLB Ausdrucks verwendet. RNA-Interferenz-Assays mit HL-1 Zellen durchf&uuml;hren, wir fanden, dass TRalpha1, aber nicht TRbeta1, ist essentiell f&uuml;r T 3-abh&auml;ngige PLB gen Unterdr&uuml;ckung. Interessanterweise angezeigt ein PLB-Reporter-gen, enth&auml;lt nur die Kern Projekttr&auml;ger Sequenzen-156, + 64, robuste T 3-abh&auml;ngige Unterdr&uuml;ckender in HL-1 Zellen, das transcriptional Repression &uuml;ber die PLB Kern Promotor, eine regulatorische Region stark konserviert bei S&auml;ugetieren durch TRalpha1 erleichtert wird. Im Einklang mit dieser Vorstellung, Chromatin Immunopr&auml;zipitation und in-vitro-Bindung Proben zeigen, dass die TRalpha1 direkt am den PLB Projekttr&auml;ger Kernregion bindet. Dar&uuml;ber hinaus ausgel&ouml;st Zusatz von T(3) Ver&auml;nderungen kovalente Histon-Modifikationen am den PLB-Projekttr&auml;ger, die gen-silencing, n&auml;mlich einen ausgepr&auml;gten R&uuml;ckgang der Histon H3 Acetylierung und Histon H3 Lysin 4 Methylierung zugeordnet sind. Zusammen genommen, unsere Daten zeigen, dass T 3-abh&auml;ngige Unterdr&uuml;ckung der PLB im kardialen Myozyten direkt durch TRalpha1 erleichtert wird und die Hormon-abh&auml;ngigen Rekrutierung von Histon-&auml;ndern beinhaltet Enzyme zugeordnete transkriptionelle Unterdr&uuml;ckender.

Unterdr&uuml;ckung der kardialen Phospholamban Genexpression ist von Schilddr&uuml;sen-Hormon-Rezeptor-{Alpha} 1 vermittelt und umfasst gezielte kovalente Histon-Modifikationen.

Article	Year
The combination of electrically stimulated gracilis neoanal sphincter and continent colonic conduit: a step forward for total anorectal reconstruction? Diseases of the colon and rectum\| PubMed ID: 14991498	2004
Repression of cardiac phospholamban gene expression is mediated by thyroid hormone receptor-{alpha}1 and involves targeted covalent histone modifications. Endocrinology\| PubMed ID: 20392835	2010

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