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FSL Constructs: A Simple Method for Modifying Cell/Virion Surfaces with a Range of Biological Markers Without Affecting their Viability

The ability to modify/visualize biological surfaces, and then study the modified cell/virion in a range of in vitro and in vivo environments is essential ...

This review describes the current state-of-the-art with respect to the modification of red blood cells for creating quality controls for use in immunohaematology.

Modification of red blood cells for laboratory quality control use.

Dieser Bericht beschreibt die aktuelle Zustand-of-the-Art in Bezug auf die &Auml;nderung der roten Blutk&ouml;rperchen zum Erstellen von Qualit&auml;tskontrollen f&uuml;r die Verwendung in der Immunh&auml;matologie.

&Auml;nderung der roten Blutk&ouml;rperchen zur Qualit&auml;tskontrolle Labor verwenden.

Glycolipids from the red cells of a rare blood group A subgroup individual, expressing the blood group A(3) phenotype with the classical mixed-field agglutination phenomenon, A(2(539G>A))/O(1) genotype, and an unusual blood group A glycolipid profile, were submitted to a comprehensive biochemical and structural analysis. To determine the nature of blood group A glycolipids in this A(3) phenotype, structural determination was carried out with complementary techniques including proton nuclear magnetic resonance (1D and 2D), mass spectrometry (MS) (nano-electrospray ionization/quadrupole time-of-flight and tandem mass spectrometry) and thin layer chromatography with immunostaining detection. As expected, total blood group A structures were of low abundance, but contrary to expectations extended-A type 2 and A type 3 glycolipids were more dominant than A hexaglycosylceramides based on type 2 chain (A-6-2 glycolipids), which normally is the major A glycolipid. Several para-Forssman (GalNAcÎ²3GbO(4)) structures, including extended forms, were identified but surmised not to contribute to the classic mixed-field agglutination of the A(3) phenotype. It is proposed that the low level of A antigen combined with an absence of extended branched glycolipids may be the factor determining the mixed-field agglutination phenomenon in this individual.

The structural basis of blood group A-related glycolipids in an A3 red cell phenotype and a potential explanation to a serological phenomenon.

Glykolipide aus die Erythrozyten einer einzelnen, selten Blut Gruppe A-Untergruppe wurden zum Ausdruck der Blutgruppe a Ph&auml;notyp mit dem klassischen gemischt-Feld-Agglutination-Ph&auml;nomen, A(2(539G&gt;A))/O(1) Genotyp und eine ungew&ouml;hnliche Blut Gruppe A Glycolipide Profil, eine umfassende biochemische und strukturelle Analyse vorgelegt. Um zu bestimmen, die Art der Blutgruppe ein Glycolipiden in diesem Kanadas Ph&auml;notyp, strukturellen Bestimmung wurde durchgef&uuml;hrt mit komplement&auml;ren Techniken, einschlie&szlig;lich Proton Kernspinresonanz (1D und 2D), Massenspektrometrie (MS) (Nano-Elektrospray-Ionisation/Quadrupol Time-of-Flight und tandem mass Spektrometrie) und D&uuml;nnschichtchromatographie Paraffinschnitten Detection. Wie erwartet, total Blut Gruppe A Strukturen der geringe F&uuml;lle, aber entgegen der Erwartungen erweitert-A Typ 2 waren und eine Typ 3-Glykolipide Grundlage dominanter als ein Hexaglycosylceramides Typ-2-Kette (A-6-2 Glykolipide), das normalerweise die gro&szlig;e eine Glycolipide. Mehrere Para-Forssman (GalNAc&beta;3GbO(4)) Strukturen, einschlie&szlig;lich der erweiterte Formen, wurden identifiziert jedoch nicht zur Deckung der klassischen gemischt-Feld-Agglutination des Ph&auml;notyps Kanadas vermutet. Es wird vorgeschlagen, dass das niedrige Niveau der ein kombiniert mit Abwesenheit von erweiterten verzweigte Glykolipide Antigen der Faktor f&uuml;r das gemischt-Feld Agglutination Ph&auml;nomen in diese Person m&ouml;glicherweise.

Die strukturelle Basis der Blutgruppe ein Verwandter von Glycolipiden in ein A3-roten Blutk&ouml;rperchen-Ph&auml;notyp und eine m&ouml;gliche Erkl&auml;rung f&uuml;r eine serologische Ph&auml;nomen.

Tools that can aid in vitro and in vivo imaging and also noninvasively determine half-life and biodistribution are required to advance clinical developments. A Function-Spacer-Lipid construct (FSL) incorporating fluorescein (FSL-FLRO4) was used to label vesicular stomatitis virus (VSV), measles virus MV-NIS (MV) and influenza virus (H1N1). The ability of FSL constructs to label these virions was established directly by FACScan of FSL-FLRO4 labeled VSV and MV, and indirectly following labeled H1N1 and MV binding to a cells. FSL-FLRO4 labeling of H1N1 was shown to maintain higher infectivity of the virus when compared with direct fluorescein virus labeling. A novel tyrosine (125)I radioiodinated FSL construct was synthesized (FSL-(125)I) from FSL-tyrosine. This was used to label VSV (VSV-FSL-(125)I), which was infused into the peritoneal cavity of laboratory mice. Bioscanning showed VSV-FSL-(125)I to localize in the liver, spleen and bloodstream in contrast to the free labels FSL-(125)I or (125)I, which localized predominantly in the liver and thyroid respectively. This is a proof-of-principle novel and rapid method for modifying virions and demonstrates the potential of FSL constructs to improve in vivo imaging of virions and noninvasively observe in vivo biodistribution.

Fluorescein and radiolabeled Function-Spacer-Lipid constructs allow for simple in vitro and in vivo bioimaging of enveloped virions.

Tools, die k&ouml;nnen Beihilfen in vitro und in-vivo Bildgebung und auch Bauteilqualit&auml;t bestimmen, Half-Life und Bioverteilung, m&uuml;ssen klinische Entwicklung voranzutreiben. Eine Funktion-Spacer-Lipid-Konstrukt (FSL) mit Fluoreszein (LFS-FLRO4) wurde verwendet, um die vesikul&auml;re Stomatitis-Virus (VSV), Masern-Virus MV-NIS (MV) und Influenza-Virus (H1N1) zu beschriften. Die F&auml;higkeit der LFS erstellt diese Virionen entstand direkt von FACScan der LFS-FLRO4 mit der Bezeichnung VSV und MV Label und indirekt folgende H1N1 und MV Bindung an eine Zellen beschriftet. LFS-FLRO4 Kennzeichnung von H1N1 zeigt h&ouml;here Infektiosit&auml;t des Virus im Vergleich zu direkten Fluoreszein Virus Kennzeichnung beizubehalten. Eine neuartige Tyrosin (125) ich Radioiodinated FSL zu konstruieren wurde synthetisiert (FSL-(125)I) von FSL-Tyrosin. Dies wurde zur Bezeichnung VSV (VSV-FSL-(125)I), die in die Bauchh&ouml;hle von Laborm&auml;usen infundiert wurde. Bioscanning zeigte VSV - LFS-(125), die ich in der Leber, der Milz und der Blutstrom im Gegensatz zu den freien lokalisieren labels FSL-(125) I oder I (125), die vorwiegend in der Leber und der Schilddr&uuml;se bzw. lokalisiert. Dies ist ein Beweis-des-Prinzip Roman und schnelle Methode zum &Auml;ndern von Virionen und zeigt das Potenzial der LFS Konstrukte zur Verbesserung der in-vivo Bildgebung der Virionen und in-vivo Bioverteilung Bauteilqualit&auml;t zu beobachten.

Article	Year
Modification of red blood cells for laboratory quality control use. Current opinion in hematology\| PubMed ID: 19680123	2009
The structural basis of blood group A-related glycolipids in an A3 red cell phenotype and a potential explanation to a serological phenomenon. Glycobiology\| PubMed ID: 20926599	2011
Fluorescein and radiolabeled Function-Spacer-Lipid constructs allow for simple in vitro and in vivo bioimaging of enveloped virions. Journal of virological methods\| PubMed ID: 21703308	2011

Stephen M. Henry

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