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Analysis of Cell Cycle Position in Mammalian Cells

The regulation of cell proliferation is central to tissue morphogenesis during the development of multicellular organisms. Furthermore, loss of control of ...

A critical event in papillomavirus transformation of human cells is the inactivation of pRB by the E7 protein. E7, like many other viral oncoproteins, possesses a well-characterized LXCXE peptide motif that interacts with the pocket domain of pRB. Disruption of the LXCXE-binding cleft on pRB renders it resistant to E7 binding and inactivation. Such binding cleft mutants of pRB are capable of inducing a G(1) arrest in the human papillomavirus 18-transformed HeLa cell line. We show here that the efficient inactivation of pRB in HeLa cells does not simply depend on the integrity of the LXCXE-binding cleft. Multiple site-directed mutants that alter conserved surfaces of the pRB pocket domain cause HeLa cells to accumulate in G(1). We divide these mutants into two classes: those that can be bound by E7 and those that cannot. The E7 interacting mutants include changes in conserved residues that lie in a groove between the A and B halves of the pocket. Surprisingly, none of these mutants show a clear defect in any of the known mechanisms for pRB inactivation by E7. Analysis of mutants that are compromised for E7 binding reveals that this interaction depends on both the LXCXE-binding cleft and on a conserved group of lysines adjacent to the cleft. These basic amino acids on pRB define a discrete interaction point with E7. These residues most likely form ionic interactions with conserved acidic amino acids on E7 since a stable pRB/E7 interaction was restored when the lysine residues on pRB and the acidic residues on E7 were interchanged.

Three regions of the pRB pocket domain affect its inactivation by human papillomavirus E7 proteins.

Drei Regionen des pRB Tasche Dom&#xE4;ne beeinflussen die Inaktivierung durch humanes Papillomavirus E7-Proteine.

The interaction between pRB and E2F is critical for control of the cell cycle and apoptosis. Here we report that pRB contains two distinct E2F binding sites. The previously identified E2F binding site on pRB is necessary for stable association with E2Fs on DNA. A second E2F interaction site is located entirely within the C-terminal domain of pRB and is specific for E2F1. E2F1/pRB complexes formed through this site have low affinity for DNA, but the interaction is sufficient for pRB to regulate E2F1-induced apoptosis, and E2F1 loses the ability to interact with this site following DNA damage. These results show that pRB interacts with individual E2F proteins in different ways and suggest that pRB's regulation of E2F1-induced apoptosis is physically separable from its transcriptional control of other E2F proteins.

pRB contains an E2F1-specific binding domain that allows E2F1-induced apoptosis to be regulated separately from other E2F activities.

pRB enth&#xE4;lt eine E2F1-Bindungsdom&#xE4;ne, die E2F1-induzierte Apoptose getrennt von anderen E2F-Aktivit&#xE4;ten reguliert werden kann.

The retinoblastoma protein (pRb) has been proposed to regulate cell cycle progression in part through its ability to interact with enzymes that modify histone tails and create a repressed chromatin structure. We created a mutation in the murine Rb1 gene that disrupted pRb's ability to interact with these enzymes to determine if it affected cell cycle control. Here, we show that loss of this interaction slows progression through mitosis and causes aneuploidy. Our experiments reveal that while the LXCXE binding site mutation does not disrupt pRb's interaction with the Suv4-20h histone methyltransferases, it dramatically reduces H4-K20 trimethylation in pericentric heterochromatin. Disruption of heterochromatin structure in this chromosomal region leads to centromere fusions, chromosome missegregation, and genomic instability. These results demonstrate the surprising finding that pRb uses the LXCXE binding cleft to control chromatin structure for the regulation of events beyond the G(1)-to-S-phase transition.

The retinoblastoma protein regulates pericentric heterochromatin.

Das Retinoblastom-Protein (pRb) ist vorgeschlagen worden, regulieren Zellzyklusprogression Teil durch seine F&auml;higkeit zur Interaktion mit Enzymen, die &auml;ndern Histon-Schw&auml;nze und eine unterdr&uuml;ckte Chromatin-Struktur zu erstellen. Wir erstellt eine Mutation des murinen Rb1-Gens, das gest&ouml;rt pRb die F&auml;higkeit zur Interaktion mit diesen Enzymen zu &uuml;berpr&uuml;fen, ob es Zellzyklus-Kontrolle betroffen. Hier zeigen wir, dass Verlust dieser Interaktion Fortschreiten durch Mitose verlangsamt und Aneuploidie f&uuml;hrt. Unsere Experimente zeigen, dass w&auml;hrend die LXCXE Bindung Website Mutation pRb die Interaktion mit dem Suv4 - 20 h-Histon-Methyltransferasen nicht st&ouml;ren es drastisch H4-K20 Trimethylation in perizentrischen Heterochromatin reduziert. St&ouml;rung des Heterochromatin Struktur in dieser chromosomalen Region f&uuml;hrt zu Zentromere Fusionen, Chromosom Missegregation und genomische Instabilit&auml;t. Diese Ergebnisse zeigen, dass die &uuml;berraschend finden, dass pRb die Gaumenspalte auf Steuerelement-Chromatin-Struktur f&uuml;r die Regulierung von Ereignissen au&szlig;erhalb der G 1-zu-S-Phase &Uuml;bergang LXCXE-Bindung verwendet.

Das Retinoblastom-Protein reguliert perizentrischen Heterochromatin.

The retinoblastoma protein (pRB) negatively regulates the progression from G1 to S phase of the cell cycle, in part, by repressing E2F-dependent transcription. pRB also possesses E2F-independent functions that contribute to cell-cycle control--for example, during pRB-mediated cell-cycle arrest pRB associates with Skp2, the F-box protein of the Skp1-Cullin-F-box protein (SCF) E3 ubiquitin ligase complex, and promotes the stability of the cyclin-dependent kinase-inhibitor p27(Kip1) through an unknown mechanism. Degradation of p27(Kip1) is mediated by ubiquitin-dependent targeting of p27(Kip1) by SCF -Skp2 (ref. 4). Here, we report a novel interaction between pRB and the anaphase-promoting complex/cyclosome (APC/C) that controls p27(Kip1) stability by targeting Skp2 for ubiquitin-mediated degradation. Cdh1, an activator of APC/C, not only interacts with pRB but is also required for a pRB-induced cell-cycle arrest. The results reveal an unexpected physical convergence between the pRB tumour-suppressor protein and E3 ligase complexes, and raise the possibility that pRB may direct APC/C to additional targets during pRB-mediated cell-cycle exit.

Retinoblastoma protein and anaphase-promoting complex physically interact and functionally cooperate during cell-cycle exit.

Das Retinoblastom-Protein (pRB) reguliert negativ das Fortschreiten von G1, S-Phase des Zellzyklus, teilweise durch Unterdr&uuml;ckung E2F-abh&auml;ngige Transkription. pRB auch besitzt E2F-unabh&auml;ngige Funktionen, die zum Zellzyklus Kontrolle--z. B. w&auml;hrend pRB-vermittelte Zellzyklus Verhaftung pRB Mitarbeiter mit Skp2, das F-Box-Protein des Skp1-Cullin-F-Box Protein (SCF) E3 Ubiquitin Ligase Komplex, beitragen und f&ouml;rdert die Stabilit&auml;t des cyclin-abh&auml;ngige Kinase-Hemmer-p27(Kip1) durch einen unbekannten Mechanismus. Abbau des p27(Kip1) wird vermittelt durch Ubiquitin-abh&auml;ngige Ausrichtung der p27(Kip1) SCF-Skp2 (Ref. 4). Hier berichten wir eine neuartige Interaktion zwischen pRB und der Anaphase-promoting Complex/Cyclosome (APC/C), dass Steuerelemente p27(Kip1) Stabilit&auml;t durch gezielte Skp2 f&uuml;r Ubiquitin vermittelten Abbau. Cdh1, Aktivator APC/C, interagiert mit pRB nicht nur sondern ist auch f&uuml;r einen Haftbefehl pRB-induzierte Zellzyklus erforderlich. Die Ergebnisse zeigen eine unerwartete k&ouml;rperliche Konvergenz zwischen den pRB-Tumor-Tumorsuppressor-Protein und E3 Ligase-komplexe und erh&ouml;hen die M&ouml;glichkeit, dass pRB APC/C an zus&auml;tzliche Ziele w&auml;hrend pRB-vermittelte Zellzyklus Ausfahrt richten kann.

Retinoblastom-Protein und Anaphase-promoting Complex physisch interagieren und funktional zusammenarbeiten, w&auml;hrend der Zellzyklus Ausfahrt.

Biochemical analysis of the retinoblastoma protein's function has received considerable attention since it was cloned just over 20 years ago. During this time pRB has emerged as a key regulator of the cell division cycle and its ability to block proliferation is disrupted in the vast majority of human cancers. Much has been learned about the regulation of E2F transcription factors by pRB in the cell cycle. However, many questions remain unresolved and researchers continue to explore this multifunctional protein. In particular, understanding how its biochemical functions contribute to its role as a tumor suppressor remains to be determined. Since pRB has been shown to function as an adaptor molecule that links different proteins together, or to particular promoters, analyzing pRB by disrupting individual protein interactions holds tremendous promise in unraveling the intricacies of its function. Recently, crystal structures have reported how pRB interacts with some of its molecular partners. This information has created the possibility of rationally separating pRB functions by studying mutants that disrupt individual binding sites. This review will focus on literature that investigates pRB by isolating functions based on binding sites within the pocket domain. This article will also discuss the prospects for using this approach to further explore the unknown functions of pRB.

Structure-function analysis of the retinoblastoma tumor suppressor protein - is the whole a sum of its parts?

Biochemische Analyse der das Retinoblastom-Protein-Funktion hat betr&auml;chtliche Aufmerksamkeit erhalten, da es vor knapp 20 Jahren geklont wurde. W&auml;hrend dieser Zeit entstanden die pRB als wichtiger Regulator des Kreislaufs Zellteilung und seine F&auml;higkeit, die Vermehrung blockieren ist in den meisten menschlichen Krebserkrankungen gest&ouml;rt. Von pRB im Zellzyklus gelernt viel &uuml;ber die Regulierung von E2F Transkriptionsfaktoren. Jedoch, viele Fragen bleiben ungel&ouml;st und Forscher dieses multifunktionale Protein zu erkunden. Insbesondere bleibt zu verstehen, wie seine biochemischen Funktionen dazu beitragen, ihre Rolle als Tumorsuppressor bestimmt werden. Da pRB Funktion als ein Adapter-Molek&uuml;l, die verschiedene Proteine zusammen oder bestimmten Promotoren links gezeigt wurde, verspricht Analyse pRB durch Unterbrechung des einzelnen Proteininteraktionen enorme in die Feinheiten ihrer Funktion zu entwirren. Vor kurzem berichteten Kristallstrukturen wie pRB mit einigen seiner molekularen Partner zusammenarbeitet. Diese Informationen schuf die M&ouml;glichkeit rational Trennung pRB Funktionen durch das Studium von Mutanten, die einzelne Bindungsstellen zu st&ouml;ren. Diesen Bericht konzentriert sich auf Literatur, die pRB erforscht durch die Isolierung von Funktionen basierend auf Websites innerhalb der Tasche-Dom&auml;ne binden. In diesem Artikel werden auch die Aussichten f&uuml;r die Verwendung dieser Ansatz weiter erkunden die unbekannten Funktionen PRB diskutieren.

Ist Struktur-Funktions-Analyse der das Retinoblastom Tumorsuppressor-Protein - das ganze eine Summe seiner Teile?

Transforming growth factor beta (TGF-beta) is a crucial mediator of breast development, and loss of TGF-beta-induced growth arrest is a hallmark of breast cancer. TGF-beta has been shown to inhibit cyclin-dependent kinase (CDK) activity, which leads to the accumulation of hypophosphorylated pRB. However, unlike other components of TGF-beta cytostatic signaling, pRB is thought to be dispensable for mammary development. Using gene-targeted mice carrying subtle missense changes in pRB (Rb1(DeltaL) and Rb1(NF)), we have discovered that pRB plays a critical role in mammary gland development. In particular, Rb1 mutant female mice have hyperplastic mammary epithelium and defects in nursing due to insensitivity to TGF-beta growth inhibition. In contrast with previous studies that highlighted the inhibition of cyclin/CDK activity by TGF-beta signaling, our experiments revealed that active transcriptional repression of E2F target genes by pRB downstream of CDKs is also a key component of TGF-beta cytostatic signaling. Taken together, our work demonstrates a unique functional connection between pRB and TGF-beta in growth control and mammary gland development.

A functional connection between pRB and transforming growth factor beta in growth inhibition and mammary gland development.

Transforming-Growth-Factor Beta (TGF-Beta) ist eine entscheidende Vermittler der Brustentwicklung und Verlust von TGF-Beta-induzierte Wachstumanhalten ist ein Markenzeichen von Brustkrebs. TGF-Beta hat sich gezeigt, cyclin-abh&auml;ngige (CDK) Kinaseaktivit&auml;t zu hemmen, f&uuml;hrt zu die Ansammlung von Hypophosphorylated pRB. Jedoch ist im Gegensatz zu anderen Komponenten des TGF-Beta zytostatische Signalisierung, pRB als entbehrlich f&uuml;r die Entwicklung der Brust. Mit Gen-bezogene M&auml;use mit subtilen Missense Ver&auml;nderungen in pRB (Rb1(DeltaL) und Rb1(NF)), wir haben entdeckt, dass pRB spielt eine wichtige Rolle in der Entwicklung der Brustdr&uuml;se. Insbesondere haben Rb1 mutant weibliche M&auml;use hyperplastisches Epithel der Milch- und Defekte in Krankenpflege aufgrund der Schmerzunempfindlichkeit, TGF-Beta-Wachstums-Hemmung. Im Gegensatz zu fr&uuml;heren Studien hervorgehoben, dass die Hemmung der cyclin/CDK-Aktivit&auml;t von TGF-Beta-Signalisierung, unseren Experimenten ergab, dass aktive transcriptional Repression E2F Zielgene von pRB stromabw&auml;rts von CDKs ist auch eine Schl&uuml;sselkomponente des TGF-Beta zytostatische signalisieren. Zusammen genommen zeigt unsere Arbeit eine einzigartige funktionale Verbindung zwischen pRB und TGF-Beta in Wachstum und Brustdr&uuml;se.

Eine funktionale Verbindung zwischen pRB und transformierende Wachstumsfaktor-Beta im Wachstum Hemmung und Brustdr&uuml;se Entwicklung.

Terminally differentiated cell types are needed to live and function in a postmitotic state for a lifetime. Cellular senescence is another type of permanent arrest that blocks the proliferation of cells in response to genotoxic stress. Here we show that the retinoblastoma protein (pRB) uses a mechanism to block DNA replication in senescence that is distinct from its role in permanent cell cycle exit associated with terminal differentiation. Our work demonstrates that a subtle mutation in pRB that cripples its ability to interact with chromatin regulators impairs heterochromatinization and repression of E2F-responsive promoters during senescence. In contrast, terminally differentiated nerve and muscle cells bearing the same mutation fully exit the cell cycle and block E2F-responsive gene expression by a different mechanism. Remarkably, this reveals that pRB recruits chromatin regulators primarily to engage a stress-responsive G(1) arrest program.

A G1 checkpoint mediated by the retinoblastoma protein that is dispensable in terminal differentiation but essential for senescence.

Unheilbar differenzierte Zelle, die Arten zu leben und funktionieren in einem postmitotischen Zustand ein Leben lang ben&ouml;tigt werden. Zellul&auml;ren Seneszenz ist eine andere Art von st&auml;ndigen Verhaftung, die die Proliferation von Zellen als Reaktion auf genotoxischen Stress blockiert. Hier zeigen wir, dass das Retinoblastom-Protein (pRB) einen Mechanismus verwendet, um DNA-Replikation im Altern zu blockieren, die sich aus seiner Rolle im st&auml;ndigen Zellzyklus-Exit zugeordnete terminal Differenzierung unterscheidet. Unsere Arbeit zeigt, dass eine subtile Mutation in pRB, die seine F&auml;higkeit zur Interaktion mit Chromatin Regulierungsbeh&ouml;rden Kr&uuml;ppel Heterochromatinization und Unterdr&uuml;ckung des E2F-responsive Promotoren in Seneszenz beeintr&auml;chtigt. Im Gegensatz dazu unheilbar differenzierte Nerven- und Zellen tragen die gleiche Mutation vollst&auml;ndig beenden des Zellzyklus und E2F-responsive Genexpression durch einen anderen Mechanismus blockieren. Bemerkenswert ist, das zeigt, dass dieses pRB Rekruten Chromatin Regulierungsbeh&ouml;rden in erster Linie um ein Stress-responsive G(1) Verhaftung Programm einzubinden.

Ein G1-Checkpoint, vermittelt durch das Retinoblastom-Protein ist entbehrlich bei terminal Differenzierung aber notwendig f&uuml;r Altern.

The interaction between viral oncoproteins such as Simian virus 40 TAg, adenovirus E1A, and human papilloma virus E7, and the retinoblastoma protein (pRB) occurs through a well characterized peptide sequence, LXCXE, on the viral protein and a well conserved groove in the pocket domain of pRB. Cellular proteins, such as histone deacetylases, also use this mechanism to interact with the retinoblastoma protein to repress transcription at cell cycle regulated genes. For these reasons this region of the pRB pocket domain is thought to play a critical role in growth suppression.

A cancer derived mutation in the retinoblastoma gene with a distinct defect for LXCXE dependent interactions.

Die Interaktion zwischen viralen Oncoproteinen wie Simian Virus 40 TAg, Adenoviren E1A, und humanes Papilloma-Virus E7 und das Retinoblastom-Protein (pRB) erfolgt durch eine gut gekennzeichnete Peptid-Sequenz, LXCXE, auf das virale Protein und eine gut erhaltene Nut in der Tasche-Dom&auml;ne PRB. Zellul&auml;re Proteine, wie z. B. Histon Deacetylases, nutzen diesen Mechanismus auch Interaktion mit dem Retinoblastom-Protein Transkription am Zellzyklus regulierte Gene zu unterdr&uuml;cken. Aus diesen Gr&uuml;nden ist diese Region der pRB Tasche Dom&auml;ne dachte, spielen eine wichtige Rolle im Wachstum Unterdr&uuml;ckung.

Ein Krebs abgeleitet Mutation im Retinoblastom-gen mit einem eindeutigen defekt f&uuml;r LXCXE abh&auml;ngige Interaktionen.

Condensation and segregation of mitotic chromosomes is a critical process for cellular propagation, and, in mammals, mitotic errors can contribute to the pathogenesis of cancer. In this report, we demonstrate that the retinoblastoma protein (pRB), a well-known regulator of progression through the G1 phase of the cell cycle, plays a critical role in mitotic chromosome condensation that is independent of G1-to-S-phase regulation. Using gene targeted mutant mice, we studied this aspect of pRB function in isolation, and demonstrate that it is an essential part of pRB-mediated tumor suppression. Cancer-prone Trp53(-/-) mice succumb to more aggressive forms of cancer when pRB's ability to condense chromosomes is compromised. Furthermore, we demonstrate that defective mitotic chromosome structure caused by mutant pRB accelerates loss of heterozygosity, leading to earlier tumor formation in Trp53(+/-) mice. These data reveal a new mechanism of tumor suppression, facilitated by pRB, in which genome stability is maintained by proper condensation of mitotic chromosomes.

Mitotic chromosome condensation mediated by the retinoblastoma protein is tumor-suppressive.

Kondensation und Segregation mitotischen Chromosomen ist ein kritischer Prozess f&uuml;r die zellul&auml;re Vermehrung und bei S&auml;ugetieren mitotische St&ouml;rungen k&ouml;nnen dazu beitragen, der Entstehung von Krebs. In diesem Bericht zeigen wir, dass das Retinoblastom-Protein (pRB), einem bekannten Regler Progression durch die G1-Phase des Zellzyklus, in mitotische Chromosomenkondensation eine wichtige Rolle spielt, die unabh&auml;ngig von G1-S-Phasen-Verordnung. Gen gezielt Mutanten M&auml;use verwenden, wir diesen Aspekt der pRB Funktion isoliert studierte und zeigen, dass es ein wesentlicher Bestandteil der pRB-vermittelte Tumor Unterdr&uuml;ckung ist. Krebs neigende Trp53(-/-) M&auml;use erliegen, aggressivere Formen von Krebs, wenn pRB die M&ouml;glichkeit, die Chromosomen kondensieren gef&auml;hrdet ist. Dar&uuml;ber hinaus zeigen wir, dass Defekte mitotische Chromosomenstruktur durch mutant pRB verursacht Verlust der Heterozygotie, beschleunigt zu fr&uuml;heren Tumorbildung bei Trp53(+/-) M&auml;usen f&uuml;hrt. Diese Daten zeigen einen neuen Mechanismus der Tumor-Unterdr&uuml;ckung, durch die pRB, in welche Genom Stabilit&auml;t durch ordnungsgem&auml;&szlig;e Kondensation mitotischen Chromosomen aufrechterhalten wird.

Mitotische Chromosomenkondensation vermittelt durch das Retinoblastom-Protein ist Tumor-unterdr&uuml;ckende.

The phosphorylation state and corresponding activity of the retinoblastoma tumor suppressor protein (Rb) are modulated by a balance of kinase and phosphatase activities. Here we characterize the association of Rb with the catalytic subunit of protein phosphatase 1 (PP1c). A crystal structure identifies an enzyme docking site in the Rb C-terminal domain that is required for efficient PP1c activity toward Rb. The phosphatase docking site overlaps with the known docking site for cyclin-dependent kinase (Cdk), and PP1 competition with Cdk-cyclins for Rb binding is sufficient to retain Rb activity and block cell-cycle advancement. These results provide the first detailed molecular insights into Rb activation and establish a novel mechanism for Rb regulation in which kinase and phosphatase compete for substrate docking.

An overlapping kinase and phosphatase docking site regulates activity of the retinoblastoma protein.

Die Phosphorylierung Zustand und entsprechende T&auml;tigkeit von dem Retinoblastom Tumorsuppressor-Protein (Rb) werden durch ein Gleichgewicht der Kinase und Phosphatase moduliert. Hier pr&auml;gen wir die Verbindung von Rb mit die katalytische Untereinheit des Protein Phosphatase 1 (PP1c). Eine Kristallstruktur identifiziert ein Enzym-docking-Standort in der Rb C-terminale Dom&auml;ne, die f&uuml;r effiziente PP1c Aktivit&auml;t in Richtung Rb erforderlich ist. Die Phosphatase-docking-Site &uuml;berschneidet sich mit der bekannten docking-Website f&uuml;r cyclin-abh&auml;ngige Kinase (Cdk) und PP1 Wettbewerb mit Cdk-Cyclins f&uuml;r Rb Bindung reicht, Rb Aktivit&auml;t und Block Zellzyklus Fortschritt zu behalten. Diese Ergebnisse liefern die erste detaillierte Molekulare Einblicke in Rb-Aktivierung und schaffen einen neuen Mechanismus f&uuml;r Rb-Verordnung in der Kinase und Phosphatase f&uuml;r Substrat Andocken zu konkurrieren.

Eine &uuml;berlappende Kinase und Phosphatase Andocken Website regelt die T&auml;tigkeit von das Retinoblastom-Protein.

The pRB (retinoblastoma protein) has a central role in the control of the G(1)-S phase transition of the cell cycle that is mediated in part through the regulation of E2F transcription factors. Upon S-phase entry pRB is phosphorylated extensively, which in turn releases bound E2Fs to drive the expression of the genes required for S-phase progression. In the present study, we demonstrate that E2F1-maintains the ability to interact with ppRB (hyperphosphorylated pRB). This interaction is dependent upon the 'specific' E2F1-binding site located in the C-terminal domain of pRB. A unique region of the marked box domain of E2F1 contacts the 'specific' site to mediate the interaction with ppRB. The mechanistic basis of the interaction between E2F1 and ppRB is subtle. A single substitution between valine and proline residues in the marked box distinguishes E2F1's ability to interact with ppRB from the inability of E2F3 to bind to the 'specific' site in ppRB. The E2F1-pRB interaction at the 'specific' site also maintains the ability to regulate the transcriptional activation of E2F1 target genes. These data reveal a mechanism by which E2F1 regulation by pRB can persist, when pRB is hyperphosphorylated and presumed to be inactive.

The biochemical basis of CDK phosphorylation-independent regulation of E2F1 by the retinoblastoma protein.

PRB (Retinoblastom-Protein) hat eine zentrale Rolle in der Kontrolle von den G-1-S-Phasen&uuml;bergang des Zellzyklus, die teilweise durch die Regulierung der E2F Transkriptionsfaktoren vermittelt wird. Beim S-Phase Eintritt ist umfassend, pRB phosphoryliert die in Zug Versionen gebunden E2Fs, den Ausdruck der Gene, die f&uuml;r die S-Phase Fortschreiten zu fahren. In der vorliegenden Studie zeigen wir, dass E2F1-unterh&auml;lt die F&auml;higkeit zur Interaktion mit PpRB (Hyperphosphorylated pRB). Diese Interaktion ist abh&auml;ngig von der &#39;spezifischen&#39; E2F1-Bindungsstelle befindet sich in der C-terminalen Dom&auml;ne PRB. Eine einzigartige Region der markierten Feld Dom&auml;ne des E2F1 wendet sich die &#39;spezifische&#39; Website, um die Interaktion mit PpRB zu vermitteln. Die mechanistische Grundlage f&uuml;r die Interaktion zwischen E2F1 und PpRB ist subtil. Eine einzelne Substitution zwischen Valin und Prolin R&uuml;ckst&auml;nde im markierten Feld unterscheidet E2F1s F&auml;higkeit zur Interaktion mit PpRB in der Unf&auml;higkeit des E2F3 an der &#39;spezifischen&#39; Website in PpRB gebunden. Die E2F1-pRB-Interaktion am Standort &#39;spezifischen&#39; unterh&auml;lt auch die F&auml;higkeit, die transkriptionelle Aktivierung E2F1 Zielgene zu regulieren. Diese Daten zeigen einen Mechanismus, durch welchen, den E2F1 Verordnung von pRB beibehalten kann, wenn pRB Hyperphosphorylated und vermutlich inaktiv sein.

Die Biochemische Grundlagen der CDK Phosphorylierung-unabh&auml;ngige Regulierung der E2F1 durch das Retinoblastom-Protein.

The ability to respond to anti-growth signals is critical to maintain tissue homeostasis and loss of this negative growth control safeguard is considered a hallmark of cancer. Negative growth regulation generally occurs during the G0/G1 phase of the cell cycle, yet the redundancy and complexity among components of this regulatory network has made it difficult to discern how negative growth cues protect cells from aberrant proliferation.

A context-specific role for retinoblastoma protein-dependent negative growth control in suppressing mammary tumorigenesis.

Die F&auml;higkeit zur Reaktion auf anti-growth Signale ist entscheidend f&uuml;r die Gewebe-Hom&ouml;ostase aufrechtzuerhalten und Verlust von dieser negativen Wachstums Kontrolle Schutz gilt als ein Markenzeichen der Krebs. Negatives Wachstum Verordnung tritt im Allgemeinen w&auml;hrend der G0/G1-Phase des Zellzyklus, doch die Redundanz und Komplexit&auml;t zwischen den Komponenten dieses regulatorischen Netzes wurden schwierig um zu erkennen, wie negatives Wachstum Hinweise zu sch&uuml;tzen Zellen aberrante Verbreitung von.

Eine Kontext-sensitive-Rolle f&uuml;r Retinoblastom-Protein-abh&auml;ngigen negativen Wachstums-Steuerelement in Mamma Tumorentstehung unterdr&uuml;cken.

The Hippo pathway coordinates organ size and cell proliferation. The retinoblastoma family of proteins regulates progression through the G0/G1 phase of the cell cycle. Disruption of either pathway contributes to cancer formation. Three recent studies in Genes & Development reveal how cellular proliferation is coordinated between these pathways. Here we discuss the implications of these studies and the new questions that they raise.

Sweet DREAMs for Hippo.

Die Hippo-Pathway koordiniert Orgel-Gr&ouml;&szlig;e und Zelle-Verbreitung. Die Retinoblastom-Familie der Proteine reguliert Fortschreiten durch die G0/G1-Phase des Zellzyklus. Unterbrechung der entweder Weg tr&auml;gt zur Entstehung von Krebs. Drei neuere Studien in Gene &amp; Entwicklung zeigen, wie zellul&auml;re Vermehrung zwischen diesen Bahnen abgestimmt ist. Hier besprechen wir die Auswirkungen dieser Studien und die neuen Fragen, die sie ausl&ouml;sen.

S&uuml;&szlig;e Tr&auml;ume f&uuml;r Hippo.

E2F transcription can lead to cell proliferation or apoptosis, indicating that E2Fs control opposing functions. In a similar manner, DNA double-strand breaks can signal to induce cell cycle arrest or apoptosis. Specifically, pRB is activated following DNA damage, allowing it to bind to E2Fs and block transcription at cell cycle promoters; however, E2F1 is simultaneously activated, leading to transcription at proapoptotic promoters. We examined this paradoxical control of E2F transcription by studying how E2F1's interaction with pRB is regulated following DNA damage. Our work reveals that DNA damage signals create multiple forms of E2F1 that contain mutually exclusive posttranslational modifications. Specifically, E2F1 phospho-serine 364 is found only in complex with pRB, while E2F1 phosphorylation at serine 31 and acetylation function to create a pRB-free form of E2F1. Both pRB-bound and pRB-free modifications on E2F1 are essential for the activation of TA-p73 and the maximal induction of apoptosis. Chromatin immunoprecipitation demonstrated that E2F1 phosphorylated on serine 364 is also present at proapoptotic gene promoters during the induction of apoptosis. This indicates that distinct populations of E2F1 are organized in response to DNA damage signaling. Surprisingly, these complexes act in parallel to activate transcription of proapoptotic genes. Our data suggest that DNA damage signals alter pRB and E2F1 to engage them in functions leading to apoptotic induction that are distinct from pRB-E2F regulation in cell cycle control.

DNA Damage Signals through Differentially Modified E2F1 Molecules To Induce Apoptosis.

E2F Transkription kann um zu Handy-Verbreitung oder Apoptosis, angibt, das E2Fs-Steuerelement, die gegens&auml;tzliche Funktionen f&uuml;hren. In &auml;hnlicher Weise k&ouml;nnen DNA-Doppel-Strang-Pausen signalisieren, zum Zellzyklus Festnahme oder Apoptose induzieren. Insbesondere ist pRB nach DNA-Sch&auml;den, erm&ouml;glicht es, die Bindung an E2Fs- und Block-Transkription am Zellzyklus Promotoren aktiviert; jedoch ist E2F1 gleichzeitig aktiviert, f&uuml;hrt zur Transkription an Proapoptotischen Promotoren. Wir untersucht diese paradoxe Kontrolle der E2F-Transkription von studiert wie E2F1s Interaktion mit pRB geregelten folgende DNA-Sch&auml;den. Unsere Arbeit zeigt, dass DNA-Sch&auml;den Signale mehrere Formen der E2F1 erstellen, die sich gegenseitig ausschlie&szlig;ende posttranslationale Modifikationen enthalten. Insbesondere ist E2F1 Phospho-Serin 364 nur im Komplex mit pRB, w&auml;hrend E2F1 Phosphorylierung an Serin 31 und Acetylierung-Funktion zum Erstellen eines Formulars pRB-frei von E2F1 gefunden. PRB gebundenen sowohl pRB-freie &Auml;nderungen an E2F1 sind essentiell f&uuml;r die Aktivierung des TA-p73 und die maximale Induktion von Apoptose. Chromatin Immunopr&auml;zipitation gezeigt, dass E2F1 auf Serin 364 phosphoryliert auch w&auml;hrend der Induktion von Apoptose Proapoptotischen gen-Promotoren anwesend ist. Dies bedeutet, dass unterschiedliche Populationen von E2F1 als Antwort auf DNA Besch&auml;digung signalisieren organisiert sind. &Uuml;berraschend, fungieren diese komplexe parallel zur Transkription von Proapoptotischen Genen zu aktivieren. Unsere Daten zeigen, dass DNA-Sch&auml;den pRB und E2F1 signalisiert, sich in Funktionen zu Apoptotic Einstieg, die getrennten pRB-E2F-Verordnung im Zellzyklus-Steuerelement zu &auml;ndern.

DNA-Sch&auml;den-Signale durch ge&auml;ndert differentiell E2F1 Molek&uuml;le zu Apoptose induzieren.

The concept that aneuploidy is a characteristic of malignant cells has long been known; however, the idea that aneuploidy is an active contributor to tumorigenesis, as opposed to being an associated phenotype, is more recent in its evolution. At the same time, we are seeing the emergence of novel roles for tumor suppressor genes and oncogenes in genome stability. These include the adenomatous polyposis coli gene (APC), p53, the retinoblastoma susceptibility gene (RB1), and Ras. Originally, many of these genes were thought to be tumor suppressive or oncogenic solely because of their role in proliferative control. Because of the frequency with which they are disrupted in cancer, chromosome instability caused by their dysfunction may be more central to tumorigenesis than previously thought. Therefore, this review will highlight how the proper function of cell cycle regulatory genes contributes to the maintenance of genome stability, and how their mutation in cancer obligatorily connects proliferation and chromosome instability.

Chromosome instability and deregulated proliferation: an unavoidable duo.

Das Konzept, dass die Aneuploidie ist ein Merkmal der malignen Zellen ist seit langem bekannt; Allerdings ist die Idee, dass die Aneuploidie ist ein aktiver Beitrag zur Tumorentstehung, im Gegensatz zu einer zugeh&ouml;rigen Ph&auml;notyp, neuere in seiner Entwicklung. Zur gleichen Zeit sehen wir die Entstehung von neuartigen Rollen f&uuml;r Tumorsuppressorgene und Onkogene in Genomstabilit&auml;t. Dazu geh&ouml;ren die adenomat&ouml;sen Polyposis coli-gen (APC), p53, die Anf&auml;lligkeit Retinoblastom-gen (RB1) und Ras. Urspr&uuml;nglich wurden viele dieser Gene als Tumor unterdr&uuml;ckende oder Onkogene allein aufgrund ihrer Rolle im proliferativ-Steuerelement. Aufgrund der H&auml;ufigkeit, mit der sie in Krebs gest&ouml;rt sind, m&ouml;glicherweise Chromosomen-Instabilit&auml;t, die durch ihre Dysfunktion verursacht mehr zentral zu Tumorentstehung als bisher angenommen. Daher wird diesen Bericht hervorheben, wie die ordnungsgem&auml;&szlig;e Funktion der Zellzyklus regulatorische Gene zur Erhaltung der Genomstabilit&auml;t beitr&auml;gt und wie ihre Mutation in Krebs verbindlich Proliferation und Chromosomen-Instabilit&auml;t verbindet.

Article	Year
Three regions of the pRB pocket domain affect its inactivation by human papillomavirus E7 proteins. Journal of virology\| PubMed ID: 12021356	2002
pRB contains an E2F1-specific binding domain that allows E2F1-induced apoptosis to be regulated separately from other E2F activities. Molecular cell\| PubMed ID: 14527410	2003
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