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Generation of an Immortalized Murine Brain Microvascular Endothelial Cell Line as an <em>In Vitro</em> Blood Brain Barrier Model

Epithelial and endothelial cells (EC) are building paracellular barriers which protect the tissue from the external and internal environment. The ...

The distribution of androgen receptor (AR) and cytochrome P450 aromatase was investigated in paraffin sections of pregnant pig ovary. Ovarian follicles and corpora lutea were isolated from ovaries obtained on Days 10, 18, 32, 71 and 90 post coitum (p.c.). Androgen receptor was localized in the nuclei of granulosa cells of follicles of various sizes. In addition, some follicles demonstrated staining in the nuclei of theca interna cells. Stroma cells also exhibited a positive immunostaining. At early and mid pregnancy (up to Day 71) AR was expressed in the nuclei of luteal cells. Corpora lutea of Day 71 showed mainly cytoplasmic staining while on Day 90 almost all luteal cells showed staining exclusively in the cytoplasm. Immuno-staining for the presence of cytochrome P450 aromatase was very faint in all investigated ovarian structures. The results could suggest that the process of androgen aromatization plays a negligible role in the ovary of the pregnant pig.

Immunohistochemical localization of androgen receptor and aromatase in the ovary of the pregnant pig.

Die Verteilung der Androgenrezeptor (AR) und Cytochrom P450 Aromatase wurde in Paraffin Abschnitten der schwangeren Schwein Eierst&ouml;cke untersucht. Ovariellen Follikel und Korpora Lutea wurden isoliert aus dem Eierst&ouml;cke abgerufen am Tage 10, 18, 32, 71 und 90 post Coitum (p.c.). In den Kernen der Granulosa Zellen der Follikel unterschiedlicher Gr&ouml;&szlig;e war Androgenrezeptor lokalisiert. Dar&uuml;ber hinaus zeigte einige Follikel in den Kernen der Theca Interna Zellen beflecken. Stroma Zellen zeigte auch eine positive Paraffinschnitten. Am Anfang und Mitte der Schwangerschaft (bis zu Tag 71) wurde AR in den Kernen der Luteal-Zellen ausgedr&uuml;ckt. Korpora Lutea Tag 71 zeigte vor allem zellplasmatische beflecken, w&auml;hrend am Tag 90 fast alle Luteal-Zellen zeigte F&auml;rbung ausschlie&szlig;lich im Zytoplasma. Immuno-F&auml;rbung auf das Vorhandensein von Cytochrom P450 Aromatase war sehr schwach in allen untersuchten Strukturen ovariellen. Die Ergebnisse k&ouml;nnten schlagen vor, da&szlig; dem Androgen Aromatization eine vernachl&auml;ssigbare Rolle im Eierstock schwanger Schwein kommt.

Immunohistochemical Lokalisation der Androgenrezeptor und Aromatase im Eierstock des Schweins schwanger.

Homeostasis of the central nervous system (CNS) microenvironment is essential for its normal function. It is maintained by the blood-brain barrier (BBB) which regulates the transport of molecules from blood into brain and backwards. The integrity of the BBB is compromised in many disorders of the human CNS; therapeutical strategies for several of these diseases include treatment with glucocorticoids, but the molecular basis of how glucocorticoids regulate BBB permeability is not understood. Here, we report the generation and characterization of a murine immortalized brain (cerebral) capillary endothelial (cEND) cell line which expresses the BBB marker occludin at intercellular tight junctions (TJ). Hydrocortisone at physiological concentrations induced upregulation of occludin, accompanied by a threefold enhancement of transendothelial electrical resistance to values up to 1000 Omegacm2. Insulin enhanced the glucocorticoid response. At the molecular level, hydrocortisone induces increase of occludin at protein and mRNA levels by activation of the glucocorticoid receptor (GR) and its binding to putative glucocorticoid responsive elements in the occludin promoter. At the same time, insulin potentiated the ligand-dependent GR transactivation via induction of the GR in this in vitro system. This study thus provides insights into the molecular processes of barrier genesis, and may help to elucidate mechanisms of brain pathology at the microvascular level.

Occludin as direct target for glucocorticoid-induced improvement of blood-brain barrier properties in a murine in vitro system.

Hom&ouml;ostase der das Mikromilieu des zentralen Nervensystems (ZNS) ist essentiell f&uuml;r ihre normale Funktion. Sie wird durch die Blut - Hirn-Schranke (BBB) betreut, die regelt den Transport von Molek&uuml;len aus dem Blut ins Gehirn und r&uuml;ckw&auml;rts. Die Integrit&auml;t der BBB ist bei vielen Erkrankungen des menschlichen ZNS gef&auml;hrdet; therapeutische Strategien f&uuml;r mehrere dieser Krankheiten z&auml;hlt die Behandlung mit Glukokortikoiden, aber die molekulare Basis wie Glukokortikoide BBB Permeabilit&auml;t regulieren wird nicht verstanden. Hier berichten wir die Generierung und Charakterisierung einer murinen verewigt Gehirn (zerebrale) Kapillare endothelial (cEND) Zelle-Linie, der ausdr&uuml;ckt, die BBB Markierung occludin bei interzellul&auml;re tight Junctions (TJ). Hydrocortison bei physiologischen Konzentrationen induzierte Hochregulation von occludin, begleitet von einer dreifachen Verst&auml;rkung der Transendothelial elektrischen Widerstand auf Werte bis zu 1000 Omegacm2. Insulin erh&ouml;ht die Glukokortikoid-Antwort. Auf molekularer Ebene induziert Hydrocortison Anstieg von occludin Protein und mRNA Niveaus durch Aktivierung von der Glucocorticoid-Rezeptor (GR) und deren Bindung an vermeintliche Glukokortikoid reagierende Elemente in der occludin Projekttr&auml;ger. Zur gleichen Zeit potenzierte Insulin die Ligand-abh&auml;ngige GR Transactivation per Induktion der GR in diesem in-vitro-System. Diese Studie so bietet Einblicke in die molekularen Prozesse der Barriere Genesis, und kann dazu beitragen, die um Mechanismen der Gehirnpathologie auf mikrovaskul&auml;re Ebene zu erhellen.

Occludin als direktes Ziel f&uuml;r Glukokortikoid-induzierte Verbesserung der Blut - Hirn-Schranke-Eigenschaften in einem murinen in-vitro-System.

Endothelial cells (ECs) from different vascular beds display certain common qualities, but each subtype is uniquely adapted to meet the demands of the underlying tissues. The structural peculiarities of intercellular junctions are, for instance, considered to account for the differences in permeability displayed by various vascular beds: strong occludin expression is unique to cerebral ECs and considered to account for the high electrical resistance and low paracellular permeability of brain microvessels which constitute the blood-brain barrier (BBB). The integrity of the BBB is compromised in many disorders of the human CNS; therapeutic strategies include treatment with glucocorticoids (GCs), which improve barrier properties of the BBB. In contrast, positive effects of GCs on peripheral vascular permeability could not be demonstrated clearly, while side-effects of prolonged GC treatment are considerable. In an effort to elucidate this difference, we analysed the expression of occludin and the glucocorticoid receptor (GR) in BBB and non-BBB (myocardium) endothelial cells. Our results demonstrate complete GR downregulation by GCs in murine non-BBB endothelial cells in vivo, whereas GC administration led to nuclear concentration of GRs in BBB endothelium. In correlation with these in vivo data, the use of cerebral and myocardial endothelial cell lines proved GR downregulation in non-BBB cells in vitro in response to GC treatment. Divergent transactivating activity of GRs in the BBB and non-BBB endothelial cellular context could be demonstrated after transfection of endothelial cells with a model GC-responsive test promoter plasmid in the presence and absence of dexamethasone. Our results thus suggest differential signalling mechanisms involved in endothelial barrier regulation, arguing for the development of tissue-specific drugs for therapeutic applications.

Glucocorticoid effects on mouse microvascular endothelial barrier permeability are brain specific.

Endothelzellen (ECs) aus verschiedenen vaskul&auml;ren Betten anzeigen bestimmte gemeinsamen Eigenschaften, aber jeder Subtyp ist eindeutig angepasst, um den Anforderungen der zugrunde liegenden Gewebe. Die strukturellen Besonderheiten der interzellul&auml;ren Kreuzungen gelten zum Beispiel die Unterschiede Permeabilit&auml;t von verschiedenen vaskul&auml;ren Betten angezeigt: starke occludin Ausdruck ist einzigartig, zerebrale ECs und als Konto f&uuml;r die hohen elektrischen Widerstand und niedrige parazellul&auml;ren Durchl&auml;ssigkeit des Gehirn Microvessels die Blut - Hirn-Schranke (BBB) darstellen. Die Integrit&auml;t der BBB ist bei vielen Erkrankungen des menschlichen ZNS gef&auml;hrdet; therapeutische Strategien umfassen Behandlung mit Glukokortikoiden (GCs), die Barriereeigenschaften der BBB zu verbessern. W&auml;hrend l&auml;ngerer GC-Behandlung Nebenwirkungen erhebliche sind konnte positive Auswirkungen der GCs auf periphere vaskul&auml;re Permeabilit&auml;t hingegen nicht deutlich, gezeigt. In dem Bestreben, diesen Unterschied zu erhellen, analysieren wir den Ausdruck von occludin und der Glucocorticoid-Rezeptor (GR) in BBB und nicht-BBB (Myokard) Endothelzellen. Unsere Ergebnisse zeigen vollst&auml;ndige GR Heraufregulation von GCs in murinen-BBB Endothelzellen in-vivo, w&auml;hrend GC-Verwaltung zu nuklearen GRs-Konzentration im BBB Endothel gef&uuml;hrt. Hat im Zusammenhang mit diesen in-vivo-Daten bewiesen zerebrale und myokardiale endothelial Zelllinien GR Heraufregulation in nicht-BBB-Zellen in vitro in Reaktion auf die GC-Behandlung. Abweichende transactivating Aktivit&auml;t der GRs im BBB und nicht-BBB k&ouml;nnte endothelial zellularer Kontext nach Transfektion von Endothelzellen mit einem Modell GC-responsive Test Projekttr&auml;ger Plasmid in der Anwesenheit und Abwesenheit von Dexamethason nachgewiesen werden. Unsere Ergebnisse weisen daher auf differenzielle Signalisierung Mechanismen endotheliale Barriere-Regulierung, als Argument f&uuml;r die Entwicklung von Gewebe-spezifischen Medikamenten f&uuml;r therapeutische Anwendungen beteiligt.

Glukokortikoid-Auswirkungen auf die Maus mikrovaskul&auml;re endotheliale Barriere Permeabilit&auml;t sind Gehirn bestimmte.

Localization of androgen receptor (AR) was investigated in ovarian follicles developing and undergoing atresia during pregnancy in the pig. Immunohistochemical staining was conducted on ovarian antral follicles isolated on different days of gestation: 10, 18, 32, 50, 70, and 90. Paraffin sections were also subjected to in situ DNA labeling. TUNEL staining revealed the presence of positive follicles on all days of pregnancy but the amount of atretic follicles increased with time. However, even on day 90 of gestation many follicles were normal, with no signs of atresia. In atretic follicles, apoptotic cells were localized predominantly in the granulosa while theca was much less affected. Atretic follicles with many apoptotic cells were negative for AR. Nuclear immunostaining for AR was positive in follicles with limited amount of apoptotic cells. The same relationship was observed in ovarian follicles isolated at various days of pregnancy.

Androgen receptor in early apoptotic follicles in the porcine ovary at pregnancy.

Lokalisierung der Androgenrezeptor (AR) wurde bei der ovariellen Follikel entwickeln und unterziehen Atresie w&auml;hrend der Schwangerschaft in das Schwein untersucht. Immunohistochemical Beflecken auf Eierstockkrebs Gave Follikel isoliert an verschiedenen Tagen der Schwangerschaft durchgef&uuml;hrt wurde: 10, 18, 32, 50, 70 und 90. Paraffin-Abschnitte wurden auch in Situ DNA Kennzeichnung unterzogen. TUNEL F&auml;rbung ergab das Vorhandensein von positiven Follikel an allen Tagen der Schwangerschaft aber die Menge der atretic Follikel mit Zeit erh&ouml;ht. Allerdings waren schon am Tag 90 der Schwangerschaft viele Follikel normal, ohne Anzeichen von Atresie. In atretic Follikel wurden Apoptotic Zellen vorwiegend in der Granulosa lokalisiert, w&auml;hrend Theca viel weniger betroffen war. Atretic Follikel mit vielen Apoptotic Zellen waren negativ f&uuml;r AR. Nuclear Paraffinschnitten, f&uuml;r AR im Follikel mit begrenzten Menge der Apoptotic Zellen positiv war. Die gleiche Beziehung wurde in ovariellen Follikel isoliert an verschiedenen Tagen der Schwangerschaft beobachtet.

Androgenrezeptor in fr&uuml;hen Apoptotic Follikel im Eierstock bei Schwangerschaft Schweinen.

The aim of this study was to investigate androgen receptor (AR) expression in developing porcine fetuses. The localization of AR was examined on embryos obtained at different days of gestation: days 18, 32, 50, 71, 90 post coitum (p.c.), and in the several tissues collected from the newborn piglets of both sexes. AR expression was first observed on day 32 p.c. in the mesonephron region. RT-PCR did not show AR mRNA on day18 p.c., but the message was present starting from day 32. In the male differentiating gonads and in the male genital ducts AR protein was present at 50, 71 and 90 days of gestation. AR protein was also detected in the cords of stromal cells within the medulla of the ovary and in stromal cells investing the oogonial nests. Pregranulosa cells on day 90 of gestation and on day 1 post partum (p.p.) immunolabelled positively for AR. In the kidney, a number of AR-positive tubules were visible while the mesenchyme in the kidney was AR-negative. Immunoreactive AR was detected predominantly in the nuclei of epithelial cells of the budding component at different stages of gestation of porcine lung. The presence of AR during gestation in non-gonadal tissues suggests a role of androgen in these tissues.

Tissue-specific distribution of the androgen receptor (AR) in the porcine fetus.

Ziel dieser Studie war, Androgen-Rezeptor (AR) Ausdruck in der Entwicklung von Schweinen F&ouml;ten zu untersuchen. Die Lokalisierung von AR wurde an Embryonen gewonnen, die an verschiedenen Tagen der Schwangerschaft untersucht: Tage 18, 32, 50, 71, 90 post Coitum (p.c.) und in den verschiedenen Geweben neugeborener Ferkel beider Geschlechter entnommen. AR Ausdruck wurde erstmals am Tag 32 p.c. in der Mesonephron-Region beobachtet. RT-PCR nicht AR-mRNA auf tag18 p.c. zeigen, aber die Nachricht war ab Tag 32. In der m&auml;nnlichen Gonaden zu unterscheiden und in den m&auml;nnlichen Genitalien Kan&auml;len war AR-Protein bei 50, 71 und 90 Tagen der Schwangerschaft. AR war auch in der Schn&uuml;re stromal Zellen innerhalb der Medulla des Ovars und stromal Zellen investieren die oogonial Nester nachgewiesen. Pregranulosa Zellen am Tag 90 der Schwangerschaft und am 1. Tag post Partum (p.p.) Immunolabelled positiv f&uuml;r AR. In der Niere waren eine Reihe von AR-Positive Tubuli sichtbar, w&auml;hrend das Mesenchym der Niere AR-negativ war. Immunreaktivem AR wurde &uuml;berwiegend in die Kerne der Epithelzellen der angehende Komponente in den verschiedenen Phasen der Schwangerschaft Schwein Lunge erkannt. AR l&auml;sst w&auml;hrend der Schwangerschaft in nicht-Gonadale Gewebe eine Rolle von Androgenen in diesen Geweben.

Gewebe-spezifischen Verteilung der Androgenrezeptor (AR) in den Schweinen F&ouml;tus.

Homeostasis of the central nervous system (CNS) microenvironment is maintained by the blood-brain barrier (BBB) which regulates the transport of molecules from blood into brain and back. Many disorders change the functionality and integrity of the BBB. Glucocorticoids are being used sucessfully in the treatment of some disorders while their effects on others are questionable. In addition, conflicting results between clinical and experimental experience using animal models has arisen, so that the results of molecular studies in animal models need to be revisited in an appropriate in vitro model of the human BBB for more effective treatment strategies. Using the human brain microvascular endothelial cell line hCMEC/D3, the influence of glucocorticoids on the expression of barrier constituting adherens junction and tight junction transmembrane proteins (VE-cadherin, occludin, claudins) was investigated and compared to other established BBB models. In hCMEC/D3 cells the administration of glucocorticoids induced expression of the targets occludin 2.75 +/- 0.04-fold and claudin-5 up to 2.32 +/- 0.11-fold, which is likely to contribute to the more than threefold enhancement of transendothelial electrical resistance reflecting barrier tightness. Our analyses further provide direct evidence that the GC hydrocortisone prevents endothelial barrier breakdown in response to pro-inflammatory stimuli (TNFalpha administration), which could be demonstrated to be partly based on maintenance of occludin levels. Our studies strongly suggest stabilization of BBB function as a mode of GC action on a molecular level in the human brain vasculature.

Differential effects of hydrocortisone and TNFalpha on tight junction proteins in an in vitro model of the human blood-brain barrier.

Hom&ouml;ostase der das Mikromilieu des zentralen Nervensystems (ZNS) wird durch die Blut - Hirn-Schranke (BBB) gepflegt, die regelt den Transport von Molek&uuml;len aus dem Blut in Gehirn und zur&uuml;ck. Viele Erkrankungen &auml;ndern die Funktionalit&auml;t und die Integrit&auml;t der BBB. Glukokortikoide sind gebrauchte erfolgreich bei der Behandlung von einigen Erkrankungen sein, w&auml;hrend ihre Auswirkungen auf andere fragw&uuml;rdig sind. Zus&auml;tzlich werden widerspr&uuml;chliche Ergebnisse zwischen klinischen und experimentellen Erfahrung mit Tiermodellen entstanden, so dass die Ergebnisse der molekularen Studien an Tiermodellen m&uuml;ssen in einem entsprechenden in-vitro-Modell von der menschlichen BBB f&uuml;r effektivere Behandlungsstrategien &uuml;berdacht werden, um. Verwenden das menschliche Gehirn mikrovaskul&auml;re Endothelzellen Linie hCMEC/D3, war der Einfluss der Glukokortikoide auf den Ausdruck der Barriere bilden Adherens Junction und tight Junction Transmembranproteine (VE-Cadherin, occludin, Claudine) untersucht und im Vergleich zu anderen etablierten BBB-Modellen. In hCMEC/D3 Zellen induziert die Verwaltung der Glukokortikoide Ausdruck der Ziele occludin 2,75 +/-0.04-fold und Claudin-5 bis 2.32 +/-0.11-fold, die, an die mehr als dreifache Verst&auml;rkung der Transendothelial elektrischen Widerstand reflektieren Barrier Dichtigkeit zu beteiligen ist. Unsere Analysen weiter bieten direkte Beweise, dass die GC-Hydrocortison endotheliale Barriere Aufschl&uuml;sselung in Reaktion auf Pro-inflammatorische Reize (TNFalpha-Administration), verhindert, die teilweise auf Wartung von occludin Ebenen beruhen nachgewiesen werden konnte. Unsere Studien empfehlen Stabilisierung des BBB-Funktion eine GC-Wirkmechanismus auf molekularer Ebene in das Gef&auml;&szlig;system des menschlichen Gehirns.

Differenzielle Auswirkungen von Hydrocortison und TNFalpha auf tight Junction-Proteine in einem in-vitro-Modell der menschlichen Blut - Hirn-Schranke.

Claudin-5, an integral tight junction protein component, plays a critical role in permeability of the endothelial cell barrier. Recently, we have shown that claudin-5 protein is down-regulated by the proinflammatory cytokine TNF alpha and its levels restored by dexamethasone treatment. In order to investigate the regulation of claudin-5 at the transcriptional level, we have cloned the murine claudin-5 promoter. The claudin-5 promoter sequence (1131 bp) showed no consensus TATA-box. We identified putative transcription factor binding sites, including six full and two half sites degenerated glucocorticoid-response elements (GREs), two NFkappaB, three Sp1, one Sp2, one Ap2, as well as three E-boxes. Serially deleted promoter constructs showed high basal activity. TNF alpha significantly reduced the promoter activity and mRNA levels of claudin-5 in brain cEND and myocardial MyEND endothelial cells. Dexamethasone treatment led to a significant increase of the murine claudin-5 promoter activity and mRNA levels in cEND cells. However, no claudin-5 induction could be observed in MyEND cells in response to dexamethasone. Our studies suggest tissue-specific regulation of the claudin-5 gene via glucocorticoids and a high vulnerability of claudin-5 to TNF alpha. This could be an important mechanism in diseases accompanied by the release of proinflammatory cytokines, for example in patients with chronic heart failure or multiple sclerosis.

Cloning and characterization of the murine claudin-5 promoter.

Claudin-5, eine integralen tight Junction-Protein-Komponente, spielt eine wichtige Rolle in Durchl&auml;ssigkeit der endothelial Zellen-Barriere. Vor kurzem haben wir gezeigt, dass Claudin-5 Protein unten-geregelt durch das Proinflammatory Cytokine TNF-Alpha und deren Ebenen durch Dexamethason Behandlung wiederhergestellt ist. Um die Regulierung der Claudin-5 auf die transkriptionelle Ebene zu untersuchen, haben wir den murinen Claudin-5-Projekttr&auml;ger geklont. Die Projekttr&auml;ger Claudin-5 Sequenz (1131 bp) zeigte keinen Konsens TATA-Box. Wir vermeintliche Transkription Faktor Bindungsstellen identifiziert, darunter sechs voll und zwei sites H&auml;lfte degenerierten Glukokortikoid-Response-Elemente (GREs), zwei NFkappaB, drei Sp1, Sp2 ein, ein Ap2 sowie drei E-Boxen. Seriell gel&ouml;scht Projekttr&auml;ger Konstrukte zeigten hohen basalen Aktivit&auml;t. TNF-Alpha deutlich reduziert, der Promotor-Aktivit&auml;t und mRNA-Stufen von Claudin-5 im Gehirn cEND und myokardiale MyEND Endothelzellen. Dexamethason-Behandlung f&uuml;hrte zu einer erheblichen Erh&ouml;hung der murinen Claudin-5-Promotor-Aktivit&auml;t und mRNA Niveaus in cEND Zellen. Jedoch konnte keine Claudin-5-Induktion in MyEND Zellen als Reaktion auf Dexamethason beobachtet werden. Unsere Studien legen nahe, Gewebe-spezifischen Regulierung des Gens Claudin-5 &uuml;ber Glukokortikoide und eine hohe Anf&auml;lligkeit von Claudin-5 f&uuml;r TNF-Alpha. Dies k&ouml;nnte ein wichtiger Mechanismus bei Krankheiten, die durch die Freisetzung von Proinflammatory Cytokines, z. B. bei Patienten mit chronischer Herzinsuffizienz oder Multiple Sklerose begleitet sein.

Klonierung und Charakterisierung des Projekttr&auml;gers murinen Claudin-5.

Estrogens have multiple effects on vascular physiology and function. In the present study, we look for direct estrogen target genes within junctional proteins.

Claudin-5 as a novel estrogen target in vascular endothelium.

&Ouml;strogene haben einen mehrfachen auf vaskul&auml;re Physiologie und Funktion. In der vorliegenden Studie suchen wir direkte &Ouml;strogen Zielgene innerhalb Junktionaler Proteine.

Claudin-5 als Ziel neuartige &Ouml;strogen in vaskul&auml;ren Endothel.

Glukokortikoide dabei wirksam stabilisieren die Blut - Hirn-Schranke und Gewebe &Ouml;dem in bestimmte neoplastischen und entz&uuml;ndlichen Erkrankungen des zentralen Nervensystems zu lindern, aber sie sind weitgehend wirkungslos bei Patienten mit akutem isch&auml;mischen Schlaganfall. Die Gr&uuml;nde f&uuml;r diese Diskrepanz sind ungel&ouml;st.

Glukokortikoid-Unempfindlichkeit bei der Hypoxie Blut - Hirn-Schranke kann durch Hemmung der der Proteasom r&uuml;ckg&auml;ngig gemacht werden.

Glucocorticoids potently stabilize the blood-brain barrier and ameliorate tissue edema in certain neoplastic and inflammatory disorders of the central nervous system, but they are largely ineffective in patients with acute ischemic stroke. The reasons for this discrepancy are unresolved.

Glucocorticoid insensitivity at the hypoxic blood-brain barrier can be reversed by inhibition of the proteasome.

During stroke the blood-brain barrier (BBB) is damaged which can result in vasogenic brain edema and inflammation. The reduced blood supply leads to decreased delivery of oxygen and glucose to affected areas of the brain. Oxygen and glucose deprivation (OGD) can cause upregulation of glucose uptake of brain endothelial cells. In this letter, we investigated the influence of MK801, a non-competitive inhibitor of the NMDA-receptor, on the regulation of the glucose uptake and of the main glucose transporters glut1 and sglt1 in murine BBB cell line cerebEND during OGD. mRNA expression of glut1 was upregulated 68.7-fold after 6h OGD, which was significantly reduced by 10Î¼M MK801 to 28.9-fold. Sglt1 mRNA expression decreased during OGD which was further reduced by MK801. Glucose uptake was significantly increased up to 907% after 6h OGD and was still higher (210%) after the 20h reoxygenation phase compared to normoxia. Ten micromolar MK801 during OGD was able to reduce upregulated glucose uptake after OGD and reoxygenation significantly. Presence of several NMDAR subunits was proven on the mRNA level in cerebEND cells. Furthermore, it was shown that NMDAR subunit NR1 was upregulated during OGD and that this was inhibitable by MK801. In conclusion, the addition of MK801 during the OGD phase reduced significantly the glucose uptake after the subsequent reoxygenation phase in brain endothelial cells.

Addition of NMDA-receptor antagonist MK801 during oxygen/glucose deprivation moderately attenuates the upregulation of glucose uptake after subsequent reoxygenation in brain endothelial cells.

W&auml;hrend Strich aus, die Blut - Hirn-Schranke (BBB) besch&auml;digt ist, kann die Vasogenic Gehirn &Ouml;deme und Entz&uuml;ndungen f&uuml;hren. Die reduzierte Blutzufuhr f&uuml;hrt zu verminderter Lieferung von Sauerstoff und Glukose zu betroffenen Bereiche des Gehirns. Sauerstoff und Glukose Entbehrung (OGD) kann Hochregulation der Glukoseaufnahme des Gehirns Endothelzellen f&uuml;hren. In diesem Brief untersuchten wir den Einfluss der MK801, ein nicht-kompetitiver Inhibitor der NMDA-Rezeptor, &uuml;ber die Regulierung der die Glukoseaufnahme und der wichtigsten Glukose-Transporter glut1 und sglt1 in murinen BBB Zelle Zeile CerebEND w&auml;hrend OGD. mRNA Ausdruck des glut1 war herraufreguliert 68.7-fold nach 6 h OGD, das erheblich bis 10&mu;M MK801 zu 28.9-fold war. Sglt1 mRNA Ausdruck ging OGD, die durch MK801 weiter reduziert wurde. Glukoseaufnahme wurde deutlich um bis zu 907 % nach 6 h OGD und war noch h&ouml;her (210 %), nachdem die 20 h-Reoxygenation-Phase im Vergleich zu Normoxia. Zehn micromolar MK801 w&auml;hrend OGD konnte herraufreguliert Glukoseaufnahme nach OGD und Reoxygenation deutlich zu reduzieren. Vorhandensein von mehreren NMDAR-Untereinheiten erwies sich auf der mRNA-Ebene in den CerebEND Zellen. Dar&uuml;ber hinaus wurde nachgewiesen, dass NMDAR Untereinheit NR1 herraufreguliert w&auml;hrend OGD war und das inhibitable war von MK801. Abschlie&szlig;end reduziert der Zusatz von MK801 w&auml;hrend der OGD-Phase deutlich die Glukoseaufnahme nach der nachfolgenden Reoxygenation-Phase im Gehirn endothelial Zellen.

Zusatz von NMDA-Rezeptor-Antagonist MK801 w&auml;hrend Sauerstoff/Glukose Entbehrung d&auml;mpft die Hochregulation der Glukoseaufnahme m&auml;&szlig;ig nach nachfolgenden Reoxygenation im Gehirn endothelial Zellen.

Article	Year
Immunohistochemical localization of androgen receptor and aromatase in the ovary of the pregnant pig. Reproductive biology\| PubMed ID: 15592587	2004
Occludin as direct target for glucocorticoid-induced improvement of blood-brain barrier properties in a murine in vitro system. The Journal of physiology\| PubMed ID: 15790664	2005
Glucocorticoid effects on mouse microvascular endothelial barrier permeability are brain specific. The Journal of physiology\| PubMed ID: 16543270	2006
Androgen receptor in early apoptotic follicles in the porcine ovary at pregnancy. Folia histochemica et cytobiologica / Polish Academy of Sciences, Polish Histochemical and Cytochemical Society\| PubMed ID: 16977798	2006
Tissue-specific distribution of the androgen receptor (AR) in the porcine fetus. Acta histochemica\| PubMed ID: 17482664	2007
Differential effects of hydrocortisone and TNFalpha on tight junction proteins in an in vitro model of the human blood-brain barrier. The Journal of physiology\| PubMed ID: 18258663	2008
Cloning and characterization of the murine claudin-5 promoter. Molecular and cellular endocrinology\| PubMed ID: 18996436	2009
Claudin-5 as a novel estrogen target in vascular endothelium. Arteriosclerosis, thrombosis, and vascular biology\| PubMed ID: 19910637	2010
Glucocorticoid insensitivity at the hypoxic blood-brain barrier can be reversed by inhibition of the proteasome. Stroke; a journal of cerebral circulation\| PubMed ID: 21330632	2011
Addition of NMDA-receptor antagonist MK801 during oxygen/glucose deprivation moderately attenuates the upregulation of glucose uptake after subsequent reoxygenation in brain endothelial cell... Neuroscience letters\| PubMed ID: 22040671	2012

Malgorzata Burek

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