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The Green Monster Process for the Generation of Yeast Strains Carrying Multiple Gene Deletions

Phenotypes  for a gene deletion are often revealed only when the mutation is tested in a  particular genetic background or environmental condition1,2. ...

Using cDNA-based array analysis combined with double-stranded RNA interference (dsRNAi), we have identified yk298h6 as a target gene of Caenorhabditis elegans TGF-beta signaling. Worms overexpressing dbl-1, a TGF-beta ligand, are 16% longer than wild type. Array analysis shows yk298h6 to be one of several genes suppressed in such worms. Disruption of yk298h6 function by dsRNAi also resulted in long worms, suggesting that it is a negative regulator of body length. yk298h6 was then mapped to, and shown to be identical to, lon-1, a known gene that affects body length. lon-1 encodes a 312 amino acid protein with a motif sequence that is conserved from plants to humans. Expression studies confirm that LON-1 is repressed by DBL-1, suggesting that LON-1 is a novel downstream component of the C.elegans TGF-beta growth regulation pathway. Consistent with this, LON-1 is expressed mainly in the larval and adult hypodermis and has dose-dependent effects on body length associated with changes in hypodermal ploidy, but not hypodermal cell proliferation.

A Caenorhabditis elegans TGF-beta, DBL-1, controls the expression of LON-1, a PR-related protein, that regulates polyploidization and body length.

Verwendung der cDNA-Arrays-Analyse kombiniert mit doppelstr&auml;ngige RNA-Interferenz (DsRNAi), haben wir yk298h6 als Ziel gen Caenorhabditis Elegans TGF-Beta signalisieren identifiziert. W&uuml;rmer &uuml;berexprimierenden dbl-1, TGF-Beta Ligand, sind 16 % mehr als Wildtyp. Array-Analyse zeigt die yk298h6 einer der mehrere Gene, die in solche W&uuml;rmer unterdr&uuml;ckt. Unterbrechung der yk298h6 durch DsRNAi f&uuml;hrte ebenfalls lange W&uuml;rmer, die darauf hindeutet, dass es einen negativen Regulator der K&ouml;rperl&auml;nge. yk298h6 war dann zugeordnet, und identisch mit Lon-1, einem bekannten Gen erwiesen, die K&ouml;rperl&auml;nge betrifft. Lon-1 kodiert ein Protein der 312 Aminos&auml;ure mit einer Motiv-Sequenz, die aus Pflanzen f&uuml;r den Menschen erhalten bleibt. Ausdruck Studien best&auml;tigen, dass die LON-1 von DBL-1, darauf hindeutet, dass die LON-1 ist ein neuartiges nachgelagerte Komponente des C.elegans TGF-Beta Wachstum Verordnung unterbunden wird. Folgerichtig LON-1 dr&uuml;ckt sich vor allem in den larvalen und Erwachsenen Subkutis und hat eine dosisabh&auml;ngige Wirkung auf K&ouml;rperl&auml;nge verbundenen hypodermal Ploidie, aber nicht hypodermal Zellvermehrung.

Ein Caenorhabditis Elegans TGF-Beta, DBL-1, steuert den Ausdruck der LON-1, ein PR-bezogene Protein, das Polyploidization und K&ouml;rper L&auml;nge regelt.

The signaling pathway initiated by the TGF-beta family member DBL-1 in Caenorhabditis elegans controls body shape in a dose-dependent manner. Loss-of-function (lf) mutations in the dbl-1 gene cause a short, small body (Sma phenotype), whereas overexpression of dbl-1 causes a long body (Lon phenotype). To understand the cellular mechanisms underlying these phenotypes, we have isolated suppressors of the Sma phenotype resulting from a dbl-1(lf) mutation. Two of these suppressors are mutations in the lon-3 gene, of which four additional alleles are known. We show that lon-3 encodes a collagen that is a component of the C. elegans cuticle. Genetic and reporter-gene expression analyses suggest that lon-3 is involved in determination of body shape and is post-transcriptionally regulated by the dbl-1 pathway. These results support the possibility that TGF-beta signaling controls C. elegans body shape by regulating cuticle composition.

A cuticle collagen encoded by the lon-3 gene may be a target of TGF-beta signaling in determining Caenorhabditis elegans body shape.

Der Signalweg initiiert von der TGF-Beta-Familienmitglied DBL-1 in Caenorhabditis Elegans Steuerelemente K&ouml;rperform in einer Dosis-abh&auml;ngigen Weise. Verlustfunktion (lf) Mutationen im DZ-1-Gen verursachen einen kurzen, kleinen K&ouml;rper (Sma-Ph&auml;notyp), w&auml;hrend eine &Uuml;berexpression von DZ-1 einen langen K&ouml;rper (Lon-Ph&auml;notyp) verursacht. Um die zellul&auml;ren Mechanismen diese Ph&auml;notypen zu verstehen, haben wir Unterdr&uuml;cker des Ph&auml;notyps Sma infolge einer Mutation dbl-1(lf) isoliert. Zwei von diesen Unterdr&uuml;cker sind Mutationen im Gen Lon-3, von dem vier zus&auml;tzliche Allele bekannt sind. Wir zeigen, dass Lon-3 eine Kollagen kodiert, die eine Komponente der Haaroberfl&auml;che C. Elegans ist. Genetische und Reporter-Gen-Ausdruck-Analysen deuten darauf hin, dass Lon-3 engagiert sich in der Bestimmung der K&ouml;rperform und der dbl-1-Weg post-transcriptionally geregelt ist. Diese Ergebnisse unterst&uuml;tzen die M&ouml;glichkeit, dass TGF-Beta Signalling Steuerelemente C. Elegans Form K&ouml;rper durch die Regulierung der Kutikula Zusammensetzung.

Eine Kutikula Kollagen der Lon-3-Gen codiert m&ouml;glicherweise ein Ziel von TGF-Beta Signalisierung bei der Bestimmung, dass Caenorhabditis Elegans Form K&ouml;rper.

Hox genes are transcriptional regulators of metazoan body regionalization along the anteroposterior axis that act by specifying positional identity in differentiating cells. ceh-13, the labial orthologue in Caenorhabditis elegans, is expressed both during embryogenesis and post- embryonic development. Using GFP reporter analysis and immunocytochemistry, we discovered a spatiotemporal pattern of gene expression in the male tail during the L3 and L4 larval stages that is TGF-beta pathway-dependent. Analysis of reporter activity in transgenic animals identified a distinct promoter region driving male tail-specific ceh-13 expression. We also report the interspecies conservation of sequence motifs within this region and speculate that, in the course of evolutionary diversification, ceh-13 may have acquired new functionality while conserving its homeotic role.

Expression of the C. elegans labial orthologue ceh-13 during male tail morphogenesis.

Hox-Gene sind transkriptionelle Regulatoren der indem K&ouml;rper Regionalisierung entlang der anteroposterioren-Achse, die durch die Angabe von positionellen Identit&auml;t in Differenzierung der Zellen wirken. CEH-13, die Labiale Orthologue in Caenorhabditis Elegans wird sowohl w&auml;hrend der Embryogenese und post-embryonalen Entwicklung ausgedr&uuml;ckt. Mit GFP Reporter Analyse und Immunzytochemie, entdeckten wir eine raumzeitliche Muster der Genexpression in den m&auml;nnlichen Schwanz w&auml;hrend der L3 und L4 larvalen Stadien d. h. TGF-Beta Weg-abh&auml;ngig. Analyse der T&auml;tigkeit der Reporter in transgenen Tieren identifiziert eine unterschiedliche Promotor-Region fahren m&auml;nnlichen Schwanz-spezifische Ceh-13 Ausdruck. Wir berichten Interspezies Erhaltung der Sequenz Motive in dieser Region und spekulieren, dass im Zuge der evolution&auml;re Diversifizierung, Ceh-13 neuen Funktionen erworben haben kann bei der Erhaltung ihrer Homeotic Rolle.

Ausdruck der C. Elegans labial Orthologue Ceh-2013 w&auml;hrend der m&auml;nnliche Schwanz Morphogenese.

Genetische Redundanz ist ein gro&szlig;er Prozentsatz von Genen zugeordnet. Wir untersuchten PTEN (Phosphatase und tensin Homolog gel&ouml;scht auf Chromosom 10) Tumorsuppressor Genfunktionen, entgangen Mutante Einzelanalysen, die mit einen Caenorhabditis Elegans genomweiten Bildschirm. Wir zeigen, dass die Zusammenarbeit von mindestens 27 Gene mit dem Wurm PTEN Homolog Daf-18 f&uuml;r verschiedene Funktionen, die vorher verborgen durch genetische Redundanz, Embryogenese Kutikula Umsatz, Eiablage und Reifung der Eizelle. Bei einem Beispiel scheint Daf-18 bilden ein Zelle-autonome Keimbahn-Signal, das konvergiert mit somatischen Gonad Signal von Ceh-18 um eine Kinase Hemmung vermittelt. Wir versorgen die Beweise, dass die Daf-18 einige entlockt der nachgeschaltete gen Daf-16 unabh&auml;ngige Funktionen.

Genetische Redundanz Masken diverse Funktionen des Tumor-Suppressor-Gens PTEN w&auml;hrend der Entwicklung von C. Elegans.

Genetic redundancy is associated with a large percentage of genes. We investigated PTEN (phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10) tumor suppressor gene functions that eluded single mutant analyses, using a Caenorhabditis elegans genome-wide screen. We show that at least 27 genes collaborate with the worm PTEN homolog daf-18 for various functions previously concealed by genetic redundancy, including embryogenesis, cuticle turnover, egg laying, and oocyte maturation. In one example, daf-18 appears to constitute a cell-autonomous germline signal that converges with a somatic gonad signal mediated by ceh-18 at a kinase inhibition. We provide evidence that daf-18 elicits some functions independent of the downstream gene daf-16.

Genetic redundancy masks diverse functions of the tumor suppressor gene PTEN during C. elegans development.

The effect of dietary 5-campestenone (campest-5-en-3-one), a chemical modification product of a naturally-occurring plant sterol, campesterol, on lipid metabolism was examined using a rat liver perfusion system. Male Sprague-Dawley rats weighing about 140 g were fed a diet supplemented with or without 0.2% 5-campestenone for 14 d. 5-Campestenone feeding resulted in a marked reduction in the concentrations of serum lipids, such as triacylglycerol (TG), cholesterol, phospholipid, and free fatty acid, without influencing food intake or growth. Then, isolated livers from both groups were perfused for 4 h in the presence of an exogenous linoelaidic acid substrate. Dietary 5-campestenone markedly elevated hepatic ketone body production, while cumulative secretions of TG, cholesterol, and phospholipid by the livers of rats fed 5-campestenone were all significantly lowered as compared to those fed without the compound: the extent of the reduction was more prominent in the secretion of TG than other lipid components. In addition, the reduction of TG secretion was concomitantly accompanied by the reduced incorporation of both exogenous and endogenous fatty acids into this lipid molecule. These results suggest that dietary 5-campestenone exerts its hypotriglyceridemic effect, at least, in part through an enhanced metabolism of endogenous and exogenous fatty acids to oxidation at the expense of esterification in rat liver.

Dietary 5-campestenone (campest-5-en-3-one) enhances fatty acid oxidation in perfused rat liver.

Die Wirkung der di&auml;tetischen 5-Campestenone (campest-5-de-3-eins), eine chemische Modifikation-Produkt von einem nat&uuml;rlich vorkommenden Pflanze Sterin, Campesterin, auf Fettstoffwechsel wurde mit einer Ratte-Leber Perfusion-System &uuml;berpr&uuml;ft. M&auml;nnliche Sprague-Dawley Ratten mit einem Gewicht von ca. 140 g wurden gef&uuml;ttert, eine Di&auml;t erg&auml;nzt mit oder ohne 0,2 % 5-Campestenone f&uuml;r die F&uuml;tterung von 14 d. 5-Campestenone f&uuml;hrte zu einer sp&uuml;rbaren Verringerung der Konzentrationen von Serum-Lipiden, wie Triacylglycerol (TG), Cholesterin, Phospholipide und freie Fetts&auml;ure, ohne Beeinflussung der Nahrungsaufnahme oder Wachstum. Isolierte Lebern von beiden Gruppen wurden dann 4 h in der Gegenwart eine exogene Linoelaidic Saures Substrat perfused. Di&auml;tetische 5-Campestenone deutlich erh&ouml;hte hepatische Keton-K&ouml;rper-Produktion, w&auml;hrend die kumulative Sekrete von TG, Cholesterin, und Phospholipide von der Leber von Ratten gef&uuml;ttert 5-Campestenone wurden alle deutlich gesenkt im Vergleich zu jenen gef&uuml;ttert ohne Verbindung: das Ausma&szlig; der Reduzierung war mehr als anderen Lipid-Komponenten in die Sekretion von TG im Vordergrund. Dar&uuml;ber hinaus wurde die Reduzierung der TG-Sekretion begleitend durch eine reduzierte sowohl exogene und endogene Fetts&auml;uren in dieser Lipid-Molek&uuml;l begleitet. Diese Ergebnisse legen nahe, dass die di&auml;tetische 5-Campestenone seiner Hypotriglyceridemic Wirkung, zumindest, teilweise durch eine verbesserte Stoffwechsel von endogenen und exogenen Fetts&auml;uren zu Oxidation auf Kosten der Veresterung in Ratte-Leber aus&uuml;bt.

Di&auml;tetische 5-Campestenone (campest-5-de-3-One) erh&ouml;ht die Fetts&auml;ure-Oxidation in durchblutete Ratte-Leber.

Systematic genetics swims forward elegantly.

Systematische Genetik schwimmt elegant nach vorn.

Individualization of head-related transfer functions (HRTFs) is important for highly accurate sound localization systems such as virtual auditory displays. A method to estimate interaural level differences (ILDs) from a listener's anthropometry is presented in this paper to avoid the burden of direct measurement of HRTFs. The main result presented in this paper is that localization is improved with nonindividualized HRTF if ILD is fitted to the listener. First, the relationship between ILDs and the anthropometric parameters was analyzed using multiple regression analysis. The azimuthal variation of the ILDs in each 1/3-octave band was then estimated from the listener's anthropometric parameters. A psychoacoustical experiment was carried out to evaluate its effectiveness. The experimental results show that the adjustment of the frequency characteristics of ILDs for a listener with the proposed method is effective for localization accuracy.

Estimation of interaural level difference based on anthropometry and its effect on sound localization.

Individualisierung der Kopf-bezogene &Uuml;bertragungsfunktionen (HRTFs) ist wichtig f&uuml;r hochgenaue Ton Lokalisierung Systeme wie virtuelle akustische Displays. Eine Methode um Schall Pegelunterschiede (ILDs) aus ein Zuh&ouml;rer die Anthropometrie zu sch&auml;tzen ist die Belastung durch direkte Messung von HRTFs vermeiden vorgestellt. Das wichtigste Ergebnis pr&auml;sentiert in diesem Papier ist, dass die Lokalisierung mit nonindividualized HRTF verbessert wird, wenn ILD zum H&ouml;rer eingebaut ist. Zun&auml;chst war die Beziehung zwischen ILDs und anthropometrische Parameter mit multiplen Regressionsanalyse analysiert. Die azimutale Variation der ILDs in jedem 1/3-Oktav-Band wurde dann von den Listener anthropometrische Parameter gesch&auml;tzt. Eine psychoakustische Experiment wurde durchgef&uuml;hrt, um seine Wirksamkeit zu bewerten. Die experimentellen Ergebnisse zeigen, dass die Anpassung der Frequenz-Merkmale der ILDs f&uuml;r einen Listener mit der vorgeschlagenen Methode f&uuml;r Lokalisierung Genauigkeit wirksam ist.

Absch&auml;tzung der interauralen H&ouml;henunterschied, die Grundlage der Anthropometrie und ihre Auswirkungen auf solide Lokalisierung.

Several studies of hypertension have shown that dietary alpha-linolenic acid (ALA) has a blood pressure-lowering effect. In the present study, we investigated the effect of dietary ALA on endothelium-dependent vascular reactivity in six-week-old spontaneously hypertensive rats (SHR). At the end of the feeding period, systolic blood pressure in the ALA group was significantly lower than in the control group. There was no significant difference in endothelium-dependent vasorelaxant response between the two diet groups. There was also no significant inter-group difference in the vascular wall thickness and media-to-lumen ratio. In conclusion, the present findings suggest that the blood pressure-lowering mechanism of dietary ALA does not involve increased sensitivity to NO or a change the in vascular morphology of the aorta.

Effect of dietary alpha-linolenic acid on vascular reactivity in aorta of spontaneously hypertensive rats.

Mehrere Studien von Bluthochdruck haben gezeigt, dass di&auml;tetische Alpha-Linolens&auml;ure (ALA) eine Blutdruck-senkende Wirkung hat. In der vorliegenden Studie untersuchten wir die Wirkung der di&auml;tetischen ALA auf Endothel-abh&auml;ngige vaskul&auml;re Reaktivit&auml;t in sechs Wochen alten spontan Hypertensive Ratten (SHR). Am Ende der F&uuml;tterung Periode war Systolischer Blutdruck in der ALA-Gruppe deutlich niedriger als in der Kontrollgruppe. Es gab keinen signifikanten Unterschied in der Endothel-abh&auml;ngige Vasorelaxant Reaktion zwischen den beiden Di&auml;t-Gruppen. Auch gab es keinen signifikanten Unterschied der B&uuml;rgerkriegsparteien in der Gef&auml;&szlig;wand Dicke und Medien-zu-Lumen-Verh&auml;ltnis. Abschlie&szlig;end die vorhanden Ergebnisse deuten an, dass der Blutdruck-senkende Mechanismus der Di&auml;t ALA darf nicht mit Sensibilit&auml;t f&uuml;r Nr. erh&ouml;ht oder eine &Auml;nderung der in vaskul&auml;re Morphologie der Aorta.

Effekt der di&auml;tetischen Alpha-Linolens&auml;ure auf vaskul&auml;re Reaktivit&auml;t in Aorta spontan Hypertensive Ratten.

Several studies have shown that dietary alpha-linolenic acid (ALA) is associated with a reduced risk of cardiovascular disease and has an antihypertensive effect. Blood pressure is regulated mainly by angiotensin-converting enzyme (ACE). In the present study, we investigated the effect of dietary ALA on ACE to clarify the mechanism of the antihypertensive effect in spontaneously hypertensive rats (SHR). Six-week-old SHR were fed a diet containing either 10% ALA-rich flaxseed oil or high oleic safflower oil as a control for four weeks. Systolic blood pressure (SBP) was measured by the tail cuff method once weekly. At the end of the feeding period, ACE activity was determined in the heart, aorta, lung and kidney. ACE mRNA in these organs was also measured by real-time PCR analysis. SBP in the ALA group was significantly lower than in the control group at 2, 3, and 4 weeks. The ACE activity and mRNA expression levels in the ALA group were significantly lower than in the control only in the aorta. In conclusion, the present findings suggest that the blood pressure-lowering mechanism of dietary ALA may be involved in the reduction of ACE activity and mRNA expression levels in the aorta of SHR.

Dietary alpha-linolenic acid inhibits angiotensin-converting enzyme activity and mRNA expression levels in the aorta of spontaneously hypertensive rats.

Mehrere Studien haben gezeigt, dass di&auml;tetische Alpha-Linolens&auml;ure (ALA) verbunden mit einem geringeren Risiko f&uuml;r Herz-Kreislauf-Erkrankungen ist und einen blutdrucksenkenden Effekt hat. Blutdruck wird haupts&auml;chlich durch Angiotensin converting Enzyme (ACE). In der vorliegenden Studie untersuchten wir die Wirkung der di&auml;tetischen ALA auf ACE, den Mechanismus der antihypertensiven Wirkung in spontan Hypertensive Ratten (SHR) zu kl&auml;ren. Sechs Wochen alten SHR wurden eine Di&auml;t mit 10 % ALA-reiche Lein&ouml;l oder hohe &Ouml;ls&auml;ure Distel&ouml;l als Steuerelement f&uuml;r vier Wochen gef&uuml;ttert. Systolischer Blutdruck (SBP) wurde von der Schwanz-Manschette-Methode einmal w&ouml;chentlich gemessen. Am Ende der F&uuml;tterung Periode wurde ACE T&auml;tigkeit in Herz, Aorta, Lunge und Niere ermittelt. ACE mRNA in diesen Organen wurde auch durch Echtzeit-PCR-Analyse gemessen. SBP in der ALA-Gruppe war deutlich niedriger als in der Kontrollgruppe, 2, 3 und 4 Wochen. Der ACE-Aktivit&auml;t und mRNA-Ausdruck-Stufen in der ALA-Gruppe waren deutlich niedriger als im Steuerelement nur in der Aorta. Abschlie&szlig;end zufolge die derzeitigen Erkenntnissen der Blutdruck-senkende Mechanismus der di&auml;tetischen ALA bei der Reduzierung der ACE-Aktivit&auml;t und mRNA-Ausdruck-Stufen in der Aorta Einstufung beteiligt sein k&ouml;nnen

Di&auml;tetische Alpha-Linolens&auml;ure hemmt das Angiotensin converting Enzym-Aktivit&auml;t und mRNA Ausdruck Ebenen in der Aorta spontan Hypertensive Ratten.

The present study investigated effects of three semen extenders and storage temperatures on post-thaw characteristics of Bryde's whale spermatozoa. Spermatozoa were collected from the vasa deferens of three mature Bryde's whales captured during the Japanese whale research in the north-west Pacific (May to August 2007) after death. The three semen extenders used for freezing were 1) a commercialized synthetic extender (AndroMed: AM), 2) Tris-based + 10% bovine serum albumin (BSA) and 3) Tris-based + egg yolk (EY). The sperm samples from the three whales were frozen with the three extenders, and the post-thaw spermatozoa were stored at three different temperatures (35 C; 20-25 C, room temperature; and 5 C) for 0, 6, 12, 24, 48 and 96 h. At each time-point, total and progressive motility (PM), viability (live or dead), the hypo-osmotic test, defective acrosomes and malformation were examined. Immediately after thawing, AM resulted in similar recovery rates (60.4 and 83.3%) in 2 of the 3 whales examined and had comparable post-thaw recovery rates to those obtained using the EY and BSA extenders. Immediately after thawing, the proportion of PM in EY (17.6%) was higher (P<0.05) than that in BSA (15.0%). In the hypo-osmotic test, the proportions of AM (26.0%) and BSA (25.2%) were higher (P<0.05) than that of EY (17.3 %). The three extenders had similar viabilities (36.7, 37.9 and 32.1%, respectively), but the viability of BSA was higher (P<0.05) than that of EY. The present study showed that a synthetic semen extender, AndroMed, could be used for cryopreservation of whale spermatozoa in addition to Tris-based extenders containing bovine serum albumin or egg yolk. Storage of the post-thaw Bryde's whale spermatozoa was better at 5 C than at room temperature or 35 C. The frozen-thawed Bryde's whale spermatozoa maintained their motility and viability for at least two days at room temperature and for four days at 5 C.

Effects of semen extenders and storage temperatures on characteristics of frozen-thawed Bryde's (Balaenoptera edeni) whale spermatozoa.

Die vorliegende Studie untersuchten die Wirkungen von drei Samen-Extender und Lagertemperaturen auf Pariser Merkmale der Brydes Wale Spermien. Spermatozoen wurden von der Wasa Ductus Deferens drei Reife Bryde Wale gefangen w&auml;hrend der japanischen Wal-Forschung im nordwestlichen Pazifik (Mai bis August 2007) nach Tod gesammelt. Die drei Samen-Extender zum Einfrieren verwendet wurden 1) ein kommerzialisierter synthetische Extender (AndroMed: AM), 2) Tris-basierte + 10 % Rinderserumalbumin (BSA) und 3) Tris-basierte + Eigelb (EY). Die Sperma-Beispiele aus den drei Wale mit den drei Extendern eingefroren wurden und die die Pariser Spermien waren bei drei verschiedenen Temperaturen (35 C; 20-25 &deg; C, Raumtemperatur; und 5C) f&uuml;r 0, 6, 12, 24, 48 und 96 h. Zu jeder Zeit-Punkt, Gesamt- und progressive Motilit&auml;t (PM) wurden die Lebensf&auml;higkeit (lebenden oder Toten), die Hypo-osmotische Test, defekte Acrosomes und Fehlbildungen untersucht. Sofort nach dem Auftauen, bin ergab &auml;hnliche Verwertungsquoten (60,4 und 83,3 %) in 2 von 3 Walen untersucht und hatte vergleichbare Pariser Verwertungsquoten f&uuml;r diejenigen mit der EY und BSA-Extender abgerufen. Sofort nach dem Auftauen, war der Anteil der PM in EY (17,6 %) h&ouml;her (P &lt; 0,05) als in BSA (15,0 %). In der Hypo-osmotische testen, die Proportionen der AM (26,0 %) und BSA (25,2 %) lagen (P &lt; 0,05) als die von EY (17,3 %). Die drei Extender hatte &auml;hnliche k&uuml;nstliche (36,7, 37,9 und 32,1 %, beziehungsweise), aber die Lebensf&auml;higkeit der BSA war h&ouml;her (P &lt; 0,05) als der EY. Die vorliegende Studie zeigte, dass einen synthetisches Sperma-Extender AndroMed, konnte verwendet werden f&uuml;r die Kryokonservierung von Wal Samenzellen neben Tris-basierte Extender, Rinderserumalbumin oder Eigelb enthalten. Lagerung von der Pariser Bryde Wal Spermien war besser bei 5 C als bei Raumtemperatur oder 35 C. Die gefroren-aufgetaut Bryde Wal Samenzellen verwaltet ihre Motilit&auml;t und Lebensf&auml;higkeit f&uuml;r mindestens zwei Tage bei Raumtemperatur und f&uuml;r vier Tage bei 5 C.

Auswirkungen von Sperma-Extender und Lagertemperaturen auf Merkmale der gefroren-aufgetaut Bryde&#39;s (Balaenoptera Edeni) Wal Spermien.

The objectives of this study were to choose an effective embryo reconstruction method and an effective post-activation agent for in vitro production of sei whale (Balaenoptera borealis) interspecies somatic cell nuclear transfer (iSCNT) embryos. Moreover, trichostatin A (TSA) treatment of whale iSCNT embryos was performed to improve the in vitro embryo development. In Experiment 1, the fusion rate was significantly higher (88.1%) in embryos reconstructed using the intracytoplasmic cell injection method (ICI) than that (48.7%) in the subzonal cell insertion (SUZI) counterpart. The rates of pseudopronucleus (PPN) formation (77.4 vs. 77.2%) and cleavage (24.5 vs. 37.0%) did not vary between ICI and SUZI. However, the PPN formation and cleavage rates were significantly (P<0.05) lower in the iSCNT embryos than in the parthenogenetic control (95.7% and 64.4%, respectively). Although 21.5% of the bovine parthenogenetic embryos developed to the blastocyst stage, no iSCNT embryo developed beyond the 6-cell stage. In Experiment 2, the cleavage rate did not vary between the TSA (50 nM)-treated and non-treated whale iSCNT embryos (30.5 vs. 32.3%, respectively). Moreover, it did not vary between the TSA-treated iSCNT and SCNT embryos (30.5 vs. 32.0%, respectively). Only one TSA non-treated iSCNT embryo developed to a compacted morula with 20 nuclei. One TSA-treated whale SCNT embryo developed to the 8-cell stage, and out of five whale iSCNT embryos, a 6-cell stage embryo was positive for whale DNA. In conclusion, bovine oocytes have the ability to support development of sei whale nuclei up to the 6-cell stage.

Production of Sei whale (Balaenoptera borealis) cloned embryos by inter- and intra-species somatic cell nuclear transfer.

Die Ziele dieser Studie waren, eine effektive Embryo-Wiederaufbau-Methode und ein wirksamer post-activation Agent f&uuml;r in-vitro-Erzeugung von Seiwal (Balaenoptera Borealis) Interspezies somatische Kerntransfer (iSCNT) Embryonen zu w&auml;hlen. Dar&uuml;ber hinaus wurde Trichostatin A (TSA) Behandlung von Wal iSCNT Embryonen durchgef&uuml;hrt, um die in-vitro-Embryonalentwicklung zu verbessern. Im Experiment 1 lag der Verschmelzung in das Gegenst&uuml;ck zu subzonal Zelle einf&uuml;gen (SUZI) deutlich h&ouml;her (88,1 %) in Embryonen rekonstruiert, sogenanntes Intrazytoplasmatische Zelle Injektion (ICI) wie diese (48,7 %). Die Preise des Pseudopronucleus (PPN) Bildung (77,4 vs. 77,2 %) und Decollet&eacute; (24,5 vs. 37,0 %) nicht zwischen ICI und SUZI variieren. PPN-Bildung und Decollet&eacute;-Preise waren jedoch signifikant (P &lt; 0,05) niedriger in der iSCNT-Embryonen als im parthenogenetic Steuerelement (95,7 % und 64,4 %, beziehungsweise). Obwohl 21,5 % von der parthenogenetic Embryonen im Blastozystenstadium entwickelt, entwickelt keine iSCNT Embryo &uuml;ber die 6-Zellen-Stadium. In Experiment 2, die Spaltung Rate nicht schwanken zwischen der TSA (50 nM)-behandelte und unbehandelte Wal iSCNT Embryonen (30,5 vs. 32,3 %, beziehungsweise). Dar&uuml;ber hinaus es nicht variieren zwischen dem TSA-behandelte iSCNT und SCNT Embryonen (30,5 vs. 32,0 %, beziehungsweise). Nur ein TSA-unbehandelt iSCNT Embryo entwickelt, um eine komprimierte Morula mit 20 Kernen. Ein TSA-behandelten Wal SCNT Embryo entwickelt, um die 8-Zellen-Stadium, und aus f&uuml;nf Wal-iSCNT-Embryonen, ein 6-Zellen-Stadium Embryo war positiv f&uuml;r Wal-DNA. Abschlie&szlig;end k&ouml;nnen bovine Oozyten zur Entwicklungsunterst&uuml;tzung Seiwal Kerne bis zu den 6-Zellen-Stadium.

Produktion der Seiwal (Balaenoptera Borealis) geklonten Embryonen durch Kerntransfer inter - und Intra-Spezies-somatischer Zellen.

The aim of this study was to investigate whether seasonal changes affected in vitro developmental competence of porcine oocytes. The relationship between atmospheric temperature and embryonic development of in vitro matured porcine oocytes following intracytoplasmic sperm injection was examined throughout the year. The blastocyst rate (31.1%) in winter (mean atmospheric temperature during December to February: -3.8 C) was significantly higher (P<0.05) than those of other seasons in 2008/2009 (19.7-23.5%; 6.3-17.5 C). The monthly mean blastocyst rates were negatively correlated with the temperatures (r=-0.5944, P<0.05). The results of the present study suggest that porcine embryos could be produced throughout the year, but the in vitro production efficiency was significantly affected by season, i.e., atmospheric temperatures. Furthermore, the results showed that winter is a favorable season for blastocyst production in the region of Obihiro, Hokkaido, Japan.

Effects of seasonal changes on in vitro developmental competence of porcine oocytes.

Ziel dieser Studie war zu untersuchen, ob saisonale &Auml;nderungen in-vitro-Entwicklungskompetenz porcine Eizellen betroffen. Die Beziehung zwischen atmosph&auml;rische Temperatur und embryonale Entwicklung von in-vitro-gereift porcine Eizellen, die folgenden Intrazytoplasmatische Spermieninjektion wurde w&auml;hrend des ganzen Jahres gepr&uuml;ft. Die Blastozyste-Rate (31,1 %) im Winter (atmosph&auml;rische Temperatur im Dezember bis Februar bedeuten: 3,8 C) war signifikant h&ouml;her (P &lt; 0,05) als die der anderen Jahreszeiten in 2008/2009 (19.7-23,5 %; 6,3-17,5 C). Mittlere Blastozyste Monatsraten wurden mit den Temperaturen negativ korreliert (R =-0.5944, P &lt; 0,05). Die Ergebnisse der vorliegenden Studie zufolge porcine Embryonen w&auml;hrend des ganzen Jahres hergestellt werden konnte, aber die Effizienz die in-vitro-Produktion wurde durch Saison, d.h. atmosph&auml;rischen Temperaturen stark beeintr&auml;chtigt. Dar&uuml;ber hinaus zeigten die Ergebnisse, dass der Winter eine positive Saison f&uuml;r Blastozyste Produktion in der Region von Obihiro, Hokkaido, Japan ist.

Saisonale &Auml;nderungen Auswirkungen auf in-vitro-Entwicklungskompetenz porcine Eizellen.

Phenotypes that might otherwise reveal a gene's function can be obscured by genes with overlapping function. This phenomenon is best known within gene families, in which an important shared function may only be revealed by mutating all family members. Here we describe the 'green monster' technology that enables precise deletion of many genes. In this method, a population of deletion strains with each deletion marked by an inducible green fluorescent protein reporter gene, is subjected to repeated rounds of mating, meiosis and flow-cytometric enrichment. This results in the aggregation of multiple deletion loci in single cells. The green monster strategy is potentially applicable to assembling other engineered alterations in any species with sex or alternative means of allelic assortment. To test the technology, we generated a single broadly drug-sensitive strain of Saccharomyces cerevisiae bearing precise deletions of all 16 ATP-binding cassette transporters within clades associated with multidrug resistance.

Knocking out multigene redundancies via cycles of sexual assortment and fluorescence selection.

Ph&auml;notypen, die sonst eine Genfunktion enth&uuml;llen k&ouml;nnte k&ouml;nnen durch Gene mit &uuml;berlappenden Funktion verdeckt werden. Dieses Ph&auml;nomen ist bekannt in gen-Familien, in denen eine wichtige gemeinsame Funktion nur aufgedeckt werden kann, durch Mutation von allen Familienmitgliedern. Hier beschreiben wir die &#39;Gr&uuml;ne Monster&#39;-Technologie, die pr&auml;zise Streichung vieler Gene erm&ouml;glicht. Bei dieser Methode ist wiederholte runden Deckung, Meiose und flie&szlig;en Cytometric Bereicherung eine Bev&ouml;lkerung L&ouml;schung St&auml;mme mit jedem L&ouml;schvorgang, gekennzeichnet durch eine durch Induktion gr&uuml;n fluoreszierendes Protein-Reporter-gen, ausgesetzt. Das Ergebnis der Aggregation von mehreren L&ouml;schung Loci in Einzelzellen. Die gr&uuml;nen Monster-Strategie ist potenziell f&uuml;r Montage sonstige manipulierte &Auml;nderungen in aller Art, die mit Sex oder alternative zur allelische Sortiment. Um die Technologie zu testen, haben wir einen einzigen weitgehend Medikamente ansprechenden Stamm von Saccharomyces Cerevisiae mit pr&auml;zise L&ouml;schungen alle 16 ATP-Bindung-Kassette-Transporter innerhalb Kladen zugeordnete erfolgt mit breiter Widerstand generiert.

Multigene Entlassungen &uuml;ber Zyklen der sexuellen Sortiment und Fluoreszenz-Auswahl aussparen.

Although RNA-mediated interference (RNAi) is a widely conserved process among eukaryotes, including many fungi, it is absent from the budding yeast Saccharomyces cerevisiae. Three human proteins, Ago2, Dicer and TRBP, are sufficient for reconstituting the RISC complex in vitro. To examine whether the introduction of human RNAi genes can reconstitute RNAi in S. cerevisiae, genes encoding these three human proteins were introduced into S. cerevisiae. We observed both siRNA and siRNA- and RISC-dependent silencing of the target gene GFP. Thus, human Ago2, Dicer and TRBP can functionally reconstitute human RNAi in S. cerevisiae, in vivo, enabling the study and use of the human RNAi pathway in a facile genetic model organism.

Reconstitution of human RNA interference in budding yeast.

Obwohl vermittelten RNA Interferenz (RNAi) ein weithin konservierten Prozess unter Eukaryoten ist, einschlie&szlig;lich viele Pilze, es fehlt von der Backhefe. Drei menschliche Proteine, Ago2, Dicer und TRBP, sind ausreichend f&uuml;r die Rekonstituierung der RISC-Komplex in Vitro. Gene, die diese drei menschliche Proteine codieren ist um zu pr&uuml;fen, ob die Einf&uuml;hrung von menschlichen Genen, RNAi RNAi in S. Cerevisiae rekonstruieren kann, in S. Cerevisiae eingef&uuml;hrt. Wir beobachteten sowohl SiRNA und SiRNA - und RISC-abh&auml;ngigen Schweigen zu den Ziel-gen GFP. Wiederherstellen, somit k&ouml;nnen menschliche Ago2, Dicer und TRBP funktional menschlichen RNAi in S. Cerevisiae, in vivo wurden somit die Studie und die Verwendung des menschlichen RNAi Biosyntheseweges in oberfl&auml;chlichen genetische Modellorganismus.

Rekonstitution der menschlichen RNA-Interferenz in der angehenden Hefe.

Drug synergy allows a therapeutic effect to be achieved with lower doses of component drugs. Drug synergy can result when drugs target the products of genes that act in parallel pathways ('specific synergy'). Such cases of drug synergy should tend to correspond to synergistic genetic interaction between the corresponding target genes. Alternatively, 'promiscuous synergy' can arise when one drug non-specifically increases the effects of many other drugs, for example, by increased bioavailability. To assess the relative abundance of these drug synergy types, we examined 200 pairs of antifungal drugs in S. cerevisiae. We found 38 antifungal synergies, 37 of which were novel. While 14 cases of drug synergy corresponded to genetic interaction, 92% of the synergies we discovered involved only six frequently synergistic drugs. Although promiscuity of four drugs can be explained under the bioavailability model, the promiscuity of Tacrolimus and Pentamidine was completely unexpected. While many drug synergies correspond to genetic interactions, the majority of drug synergies appear to result from non-specific promiscuous synergy.

Systematic exploration of synergistic drug pairs.

Droge Synergie erm&ouml;glicht eine therapeutische Wirkung mit niedrigeren Dosen Komponente Drogen erreicht werden. Droge Synergie kann entstehen, wenn Medikamente die Produkte von Genen konzentrieren, die in parallelen Bahnen (&#39;spezifische Synergie&#39;) zu handeln. Solchen F&auml;llen der Droge Synergie sollte tendenziell synergistische genetische Interaktion zwischen den entsprechenden Zielgene entsprechen. Alternativ kann &#39;unterschiedslosen Synergie&#39; entstehen, wenn eine Droge unspezifisch die Auswirkungen vieler anderer Drogen, z. B. erh&ouml;hte Bioverf&uuml;gbarkeit erh&ouml;ht. Um die relative H&auml;ufigkeit dieser Droge Synergie-Typen zu bewerten, haben wir 200 Paare von Antimykotika in S. Cerevisiae gepr&uuml;ft. Wir fanden 38 antimykotische Synergien, die 37 davon Roman waren. W&auml;hrend 14 F&auml;llen Droge Synergie genetische Interaktion entsprach, nachgingen 92 % die Synergien entdeckten wir nur sechs h&auml;ufig synergistische Drogen. Obwohl Promiskuit&auml;t von vier Medikamenten unter die Bioverf&uuml;gbarkeit-Modell erkl&auml;rt werden kann, kam die Promiskuit&auml;t Tacrolimus und Pentamidin v&ouml;llig unerwartet. W&auml;hrend viele Drogen Synergien genetische Interaktionen entsprechen, scheinen die meisten Drogen Synergien aus unspezifischen unterschiedslosen Synergien ergeben.

Article	Year
A Caenorhabditis elegans TGF-beta, DBL-1, controls the expression of LON-1, a PR-related protein, that regulates polyploidization and body length. The EMBO journal\| PubMed ID: 11867534	2002
A cuticle collagen encoded by the lon-3 gene may be a target of TGF-beta signaling in determining Caenorhabditis elegans body shape. Genetics\| PubMed ID: 12524338	2002
Expression of the C. elegans labial orthologue ceh-13 during male tail morphogenesis. Developmental biology\| PubMed ID: 12812794	2003
Genetic redundancy masks diverse functions of the tumor suppressor gene PTEN during C. elegans development. Genes & development\| PubMed ID: 16481471	2006
Dietary 5-campestenone (campest-5-en-3-one) enhances fatty acid oxidation in perfused rat liver. Journal of nutritional science and vitaminology\| PubMed ID: 16802693	2006
Systematic genetics swims forward elegantly. Molecular systems biology\| PubMed ID: 16969340	2006
Estimation of interaural level difference based on anthropometry and its effect on sound localization. The Journal of the Acoustical Society of America\| PubMed ID: 18189573	2007
Effect of dietary alpha-linolenic acid on vascular reactivity in aorta of spontaneously hypertensive rats. Journal of oleo science\| PubMed ID: 19367077	2009
Dietary alpha-linolenic acid inhibits angiotensin-converting enzyme activity and mRNA expression levels in the aorta of spontaneously hypertensive rats. Journal of oleo science\| PubMed ID: 19491530	2009
Effects of semen extenders and storage temperatures on characteristics of frozen-thawed Bryde's (Balaenoptera edeni) whale spermatozoa. The Journal of reproduction and development\| PubMed ID: 19672041	2009
Production of Sei whale (Balaenoptera borealis) cloned embryos by inter- and intra-species somatic cell nuclear transfer. The Journal of reproduction and development\| PubMed ID: 19893277	2010
Effects of seasonal changes on in vitro developmental competence of porcine oocytes. The Journal of reproduction and development\| PubMed ID: 20424381	2010
Knocking out multigene redundancies via cycles of sexual assortment and fluorescence selection. Nature methods\| PubMed ID: 21217751	2011
Reconstitution of human RNA interference in budding yeast. Nucleic acids research\| PubMed ID: 21252293	2011
Systematic exploration of synergistic drug pairs. Molecular systems biology\| PubMed ID: 22068327	2011

Yo Suzuki

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