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A New Screening Method for the Directed Evolution of Thermostable Bacteriolytic Enzymes

Directed evolution is defined as a method to harness natural selection in order to engineer proteins to acquire particular properties that are not ...

The purpose of the present study was to identify 12 Bacillus isolates that had been obtained from root canals of teeth requiring endodontic therapy and from periodontal pockets in severe marginal periodontitis, and to determine whether these isolates exhibited extracellular proteolytic activity and, using in vitro assays, whether any such activity could degrade substrates that would be pathophysiologically relevant with regard to the production of endodontic and periodontal lesions. Biochemical and carbohydrate fermentation patterns were used in the identification of all strains, which was confirmed by determination of the16S rRNA gene sequence for strain BJ0055. Screening for production of extracellular proteolytic activity by all strains was done with a general proteinase substrate. All isolates were identified as representing Bacillus pumilus and all exhibited extracellular proteolytic activity. The putative pathophysiological relevance of extracellular proteinase production in strain BJ0055 was assessed using fluorophore-labelled elastin and collagen and several chromogenic peptides. Probable classes of proteinases acting on each substrate were investigated using class-specific inhibitors. Activity-pH profiles were determined in buffers at different pH values. Extracellular activities that were caseinolytic, elastinolytic, collagenolytic, glutamyl endopeptidase-like, and alanyl tripeptidyl peptidase-like were observed. No trypsin-like activities were detected. Serine- and chymotrypsin-like serine proteinase activities were detected, with activity observed at neutral and alkaline, but not acidic, pH. B. pumilus strains isolated from endodontic and periodontal lesions exhibited extracellular activities that degrade elastin, collagen and other substrates. These activities may be virulence factors that contribute to tissue damage in apical periodontitis and severe marginal periodontitis.

Extracellular proteolytic activities expressed by Bacillus pumilus isolated from endodontic and periodontal lesions.

Der Zweck der vorliegenden Studie war 12 Bacillus-Isolate zu identifizieren, die von Wurzelkan&auml;le Z&auml;hne endodontische Therapie und parodontale Taschen in schweren marginale Parodontitis erhalten hatte, und um festzustellen, ob diese Isolate extrazellul&auml;re proteolytische Aktivit&auml;t und mit in-vitro-Tests, ausgestellt, ob eine solche Aktivit&auml;t Substrate beeintr&auml;chtigen k&ouml;nnte, die w&auml;re im Hinblick auf die Produktion von endodontischen und parodontale L&auml;sionen Pathophysiologisch relevante. Biochemische und Kohlenhydrat-G&auml;rung-Muster dienten bei der Identifizierung von allen St&auml;mmen, die durch Bestimmung der the16S rRNA-Gen-Sequenz f&uuml;r Stamm BJ0055 best&auml;tigt wurde. Screening f&uuml;r Produktion von extrazellul&auml;ren proteolytische Aktivit&auml;t durch alle St&auml;mme erfolgte mit einem allgemeinen Proteinase-Substrat. Alle Isolate wurden als Vertreter der Bacillus Pumilus identifiziert und alle ausgestellt extrazellul&auml;re proteolytische Aktivit&auml;t. Die vermeintliche pathophysiologische Relevanz der extrazellul&auml;ren Proteinase-Produktion in Stamm BJ0055 wurde anhand Fluorophore beschriftet Elastin und Kollagen und mehrere chromogene Peptide gepr&uuml;ft. Wahrscheinliche Klassen von Proteinasen, die auf jedes Substrat wurden mit klassenspezifische Hemmnissen untersucht. Aktivit&auml;t-pH-Profile wurden in Puffern bei verschiedenen pH-Werten bestimmt. Extrazellul&auml;re Aktivit&auml;ten, die Caseinolytic, Elastinolytic, Collagenolytic und Glutamyl Endopeptidase-wie Alanyl Tripeptidyl Peptidase-wie waren wurden beobachtet. Keine Trypsin-&auml;hnlichen Aktivit&auml;ten gefunden. Serin - und Chymotrypsin-wie Serin-Proteinase-Aktivit&auml;ten wurden erkannt, mit Aktivit&auml;t beobachtet bei neutralen und alkalischen, aber nicht sauer, pH. B. Pumilus-St&auml;mme isoliert von endodontischen und parodontale L&auml;sionen ausgestellt extrazellul&auml;re Aktivit&auml;ten, die Elastin, Collagen und anderen Substraten zu beeintr&auml;chtigen. Diese Aktivit&auml;ten m&ouml;glicherweise Virulenzfaktoren, die zu Gewebesch&auml;den im apikalen Parodontitis und schwere marginale Parodontitis beitragen.

Extrazellul&auml;re proteolytische Aktivit&auml;ten durch Bacillus Pumilus von endodontischen und parodontale L&auml;sionen isoliert ausgedr&uuml;ckt.

Lysins are phage-encoded, peptidoglycan (cell wall) hydrolases that accumulate in the bacterial cytoplasm during a lytic infection cycle. Late during infection, the lysins undergo holin-mediated translocation across the inner membrane into the peptidoglycan matrix where they cleave cell wall covalent bonds required for wall stability and allow bacterial lysis and progeny phage release. This potent hydrolytic activity is now the foundation of a powerful genetic-based screening process for the identification and analysis of phage lysin proteins. Here, we describe a method for identifying a lysin, PlyG, from a bacteriophage that specifically infects the Gram-positive organism Bacillus anthracis; however, the techniques described can be adapted to clone, express, and analyze lysins from any phage infecting Gram-positive bacteria or possibly even Gram-negative bacteria.

A genetic screen to identify bacteriophage lysins.

Lysine sind Phage-codierte, Peptidoglycan (Zellwand)-HYDROLASEN ansammeln, die im bakteriellen Zytoplasma w&auml;hrend eines lytische Infektion. Sp&auml;t w&auml;hrend der Infektion unterziehen die lysine holin-vermittelte Translokation durch die innere Membran in die Peptidoglycan-Matrix, wo sie Zellwand kovalente Bindungen f&uuml;r die Stabilit&auml;t der Mauer zu Zerspalten und bakterielle Zerst&ouml;rung und Nachkommenschaft Phage Freigabe erlauben. Diese potente hydrolytische Aktivit&auml;t ist jetzt die Grundlage f&uuml;r eine starke genetische Grundlage Screening-Verfahren zur Identifizierung und Analyse der Phage Lysin Proteine. Hier beschreiben wir eine Methode zur Identifizierung einer Lysin, PlyG, aus einer Bakteriophage, der speziell die grampositive Organismus Bacillus Anthracis infiziert; Allerdings k&ouml;nnen die beschriebenen Techniken Klonen, express, und analysieren lysine aus jeder Phage gram-positiver Bakterien zu infizieren oder m&ouml;glicherweise sogar Gramnegative Bakterien angepasst werden.

Ein genetischer Schirm Bakteriophage lysine zu identifizieren.

Streptococcus equi is the causative agent of the purulent infection equine strangles. This disease is transmitted through shedding of live bacteria from nasal secretions and abscess drainage or by contact with surfaces contaminated by the bacteria. Disinfectants are effective against S. equi, but inactivation by environmental factors, damage to equipment, and toxicity are of great concern. Bacteriophage-encoded lysins (cell wall hydrolases) have been investigated as therapeutic agents due to their ability to lyse susceptible gram-positive organisms. Here, we investigate the use of one lysin, PlyC, as a narrow-spectrum disinfectant against S. equi. This enzyme was active against >20 clinical isolates of S. equi, including both S. equi subsp. equi and S. equi subsp. zooepidemicus. Significantly, PlyC was 1,000 times more active on a per weight basis than Virkon-S, a common disinfecting agent, with 1 microg of enzyme able to sterilize a 10(8) CFU/ml culture of S. equi in 30 min. PlyC was subjected to a standard battery of tests including the Use Dilution Method for Testing Disinfectants and the Germicidal Spray Products Test. Results indicate that aerosolized PlyC can eradicate or significantly reduce the S. equi load on a variety of materials found on common stable and horse-related equipment. Additionally, PlyC was shown to retain full activity under conditions that mimic a horse stable, i.e., in the presence of nonionic detergents, hard water, or organic materials. We propose PlyC as the first protein-based, narrow-spectrum disinfectant against S. equi, which may augment or supplement the use of broad-spectrum disinfectants in barns and stables where equine strangles is prevalent.

Use of a bacteriophage lysin, PlyC, as an enzyme disinfectant against Streptococcus equi.

Streptococcus Equi ist der Erreger der eitrigen Infektion pferdeartige stranguliert. Diese Krankheit wird vererbt, durch Blutvergie&szlig;en Leben Bakterien aus nasalen Absonderungen und Abszess Drainage oder durch Kontakt mit Oberfl&auml;chen, die durch Bakterien kontaminiert. Desinfektionsmittel sind wirksam gegen S. Equi, aber Inaktivierung durch Umweltfaktoren, Sch&auml;den an Ger&auml;ten, und Toxizit&auml;t sind von gro&szlig;er Bedeutung. Bakteriophage-codierte lysine (Zellwand-HYDROLASEN) wurden als Therapeutika aufgrund ihrer F&auml;higkeit aufzul&ouml;sen empf&auml;nglicher Gram-positive Organismen untersucht. Hier untersuchen wir die Verwendung von einem Lysin, PlyC, als schmal-Spektrum Desinfektionsmittel gegen S. Equi. Dieses Enzym war aktiv gegen &gt; 20 klinische Isolate von S. Equi, einschlie&szlig;lich S. Equi subsp. Equi und S. Equi subspecies Zooepidemicus. Bezeichnenderweise wurde PlyC, 1.000 mal mehr aktiv pro Gewichtsanteil als Virkon-S, eine gemeinsame Desinfektionsmittels mit 1 &micro;g des Enzyms in der Lage um zu sterilisieren eine 10 KBE/ml Kultur der S. Equi in 30 min. PlyC wurde ein standard-Akku Tests, einschlie&szlig;lich der Verwendung-Verd&uuml;nnung-Methode f&uuml;r die Pr&uuml;fung von Desinfektionsmitteln und die keimt&ouml;tende Spray-Produkte-Test-Ergebnisse zeigen, die PlyC zerst&auml;ubt zu beseitigen oder erheblich reduzieren die S. Equi Belastung f&uuml;r eine Vielzahl von Materialien k&ouml;nnen auf gemeinsamen Stall und Pferd-Ausr&uuml;stung gefunden. Dar&uuml;ber hinaus zeigte PlyC voller Aktivit&auml;t unter Bedingungen beibehalten werden, die einen Pferdestall, d. h. in Anwesenheit von nichtionischen Detergentien, hartes Wasser oder organischen Materialien zu imitieren. Wir schlagen PlyC, wie das erste Protein-basierte, schmal-Spektrum Desinfektionsmittel gegen S. Equi, die erweitern oder erg&auml;nzen den Einsatz von Breitspektrum Desinfektionsmittel in Scheunen und St&auml;llen, wo Pferde erw&uuml;rgt, weit verbreitet ist.

Einsatz von Lysin ein Bakteriophage, PlyC, als ein Enzym-Desinfektionsmittel gegen Streptococcus Equi.

The number of microbial pathogens resistant to antibiotics continues to increase even as the rate of discovery and approval of new antibiotic therapeutics steadily decreases. Many researchers have begun to investigate the therapeutic potential of naturally occurring lytic enzymes as an alternative to traditional antibiotics. However, direct characterization of lytic enzymes using techniques based on synthetic substrates is often difficult because lytic enzymes bind to the complex superstructure of intact cell walls. Here we present a new standard for the analysis of lytic enzymes based on turbidity assays which allow us to probe the dynamics of lysis without preparing a synthetic substrate. The challenge in the analysis of these assays is to infer the microscopic details of lysis from macroscopic turbidity data. We propose a model of enzymatic lysis that integrates the chemistry responsible for bond cleavage with the physical mechanisms leading to cell wall failure. We then present a solution to an inverse problem in which we estimate reaction rate constants and the heterogeneous susceptibility to lysis among target cells. We validate our model given simulated and experimental turbidity assays. The ability to estimate reaction rate constants for lytic enzymes will facilitate their biochemical characterization and development as antimicrobial therapeutics.

Quantifying enzymatic lysis: estimating the combined effects of chemistry, physiology and physics.

Die Anzahl der mikrobiellen Krankheitserregern, die gegen Antibiotika resistent w&auml;chst st&auml;ndig, auch wenn die Entdeckung und Zulassung von neuen antibiotischen Therapeutika stetig abnimmt. Viele Forscher haben damit begonnen, das therapeutische Potenzial von nat&uuml;rlich vorkommenden untersuchen lytischer Enzyme als Alternative zu herk&ouml;mmlichen Antibiotika. Direkte Charakterisierung der lytische Enzyme mit Techniken basierend auf synthetische Substrate ist jedoch oft schwierig, da lytischer Enzyme an der komplexen &Uuml;berbau intakte Zellw&auml;nde zu binden. Hier pr&auml;sentieren wir einen neuen Standard f&uuml;r die Analyse der lytische Enzyme, die auf der Grundlage von Tr&uuml;bung-Proben, die uns erlauben, die Dynamik der Zerst&ouml;rung Sonde ohne Vorbereitung ein synthetisches Substrat. Die Herausforderung bei der Analyse der diese Proben ist die mikroskopische Details der Zerst&ouml;rung von makroskopischen Tr&uuml;bung Daten abzuleiten. Wir schlagen ein Modell des enzymatische Lyse, das die Chemie verantwortlich f&uuml;r Bond Spaltung mit den physikalischen Mechanismen zu Zellwand Fehler integriert. Dann stellen wir eine L&ouml;sung f&uuml;r ein inverses Problem wir die Geschwindigkeitskonstanten der Reaktion sch&auml;tzen und der heterogenen Anf&auml;lligkeit f&uuml;r Lyse unter den Zielzellen. Wir &uuml;berpr&uuml;fen unser Modell simuliert und experimentelle Tr&uuml;bung Proben gegeben. Die F&auml;higkeit, Reaktion Geschwindigkeitskonstanten f&uuml;r lytischer Enzyme zu sch&auml;tzen wird ihre biochemische Charakterisierung und Entwicklung als antimikrobielle Therapie erleichtern.

Quantifizierung der enzymatische Lyse: sch&auml;tzen die Auswirkungen der Chemie, Physiologie und Physik.

Abstract Group A streptococcus (Streptococcus pyogenes) is an exclusively human pathogen that causes a wide spectrum of diseases ranging from pharyngitis, to impetigo, to toxic shock, to necrotizing fasciitis. The diversity of these disease states necessitates that S. pyogenes possess the ability to modulate both the innate and adaptive immune responses. SpeB, a cysteine proteinase, is the predominant secreted protein from S. pyogenes. Due to its relatively indiscriminant specificity, this enzyme has been shown to degrade the extracellular matrix, cytokines, chemokines, complement components, immunoglobulins, and serum protease inhibitors, to name but a few of the known substrates. Additionally, SpeB regulates other streptococcal proteins by degrading them or releasing them from the bacterial surface. Despite the wealth of literature on putative SpeB functions, there remains much controversy about this enzyme because many of reported activities would produce contradictory physiological results. Here we review all known host and bacterial protein substrates for SpeB, their cleavage sites, and discuss the role of this enzyme in streptococcal pathogenesis based on the current literature.

The cysteine proteinase SpeB from Streptococcus pyogenes - a potent modifier of immunologically important host and bacterial proteins.

Abstrakt-Gruppe A-Streptokokken (Streptococcus Pyogenes) ist ein ausschlie&szlig;lich menschliche Krankheitserreger, die ein breites Spektrum an Krankheiten, die von Pharyngitis, bis hin zu Impetigo, toxischen Schock, nekrotisierende Fasziitis verursacht. Die Vielfalt dieser Krankheit Staaten erfordert, dass S. Pyogenes die F&auml;higkeit besitzen, sowohl die angeborene und adaptive Immunantworten zu modulieren. Aus, ein Cystein-Proteinase, ist das vorherrschende sezernierte Protein von S. Pyogenes. Aufgrund seiner relativ Indiscriminant Spezifit&auml;t, dieses Enzym nachweislich der extrazellul&auml;ren Matrix, Zytokine, Chemokine, Erg&auml;nzung Komponenten, Immunglobuline und Serum-Protease-Inhibitoren, um nur einige der bekannten Substrate zu beeintr&auml;chtigen. Dar&uuml;ber hinaus reguliert aus anderen Streptokokken Proteine durch erniedrigende ihnen oder ihrer Freigabe von der bakteriellen Oberfl&auml;che. Trotz der F&uuml;lle der Literatur &uuml;ber vermeintliche aus Funktionen bleibt es viel Kontroverse &uuml;ber dieses Enzym, weil viele der gemeldeten Aktivit&auml;ten widerspr&uuml;chliche physiologische Ergebnissen f&uuml;hren w&uuml;rde. Hier &uuml;berpr&uuml;fen wir alle bekannten Host und bakterielle Protein-Substrate f&uuml;r aus, ihre Spaltung-Websites, und die Rolle dieses Enzyms in Streptokokken Pathogenese, basierend auf der aktuellen Literatur zu diskutieren.

Die Cystein-Proteinase aus von Streptococcus Pyogenes - ein potenter Modifizierer immunologisch wichtige Host und bakterielle Proteine.

Group A streptococcus (Streptococcus pyogenes) is an exclusively human pathogen that causes a wide spectrum of diseases ranging from pharyngitis, to impetigo, to toxic shock, to necrotizing fasciitis. The diversity of these disease states necessitates that S. pyogenes possess the ability to modulate both the innate and adaptive immune responses. SpeB, a cysteine proteinase, is the predominant secreted protein from S. pyogenes. Because of its relatively indiscriminant specificity, this enzyme has been shown to degrade the extracellular matrix, cytokines, chemokines, complement components, immunoglobulins, and serum protease inhibitors, to name but a few of the known substrates. Additionally, SpeB regulates other streptococcal proteins by degrading them or releasing them from the bacterial surface. Despite the wealth of literature on putative SpeB functions, there remains much controversy about this enzyme because many of reported activities would produce contradictory physiological results. Here we review all known host and bacterial protein substrates for SpeB, their cleavage sites, and discuss the role of this enzyme in streptococcal pathogenesis based on the current literature.

Cysteine proteinase SpeB from Streptococcus pyogenes - a potent modifier of immunologically important host and bacterial proteins.

Gruppe A-Streptokokken (Streptococcus Pyogenes) ist ein ausschlie&szlig;lich menschliche Krankheitserreger, die ein breites Spektrum an Krankheiten, die von Pharyngitis, bis hin zu Impetigo, toxischen Schock, nekrotisierende Fasziitis verursacht. Die Vielfalt dieser Krankheit Staaten erfordert, dass S. Pyogenes die F&auml;higkeit besitzen, sowohl die angeborene und adaptive Immunantworten zu modulieren. Aus, ein Cystein-Proteinase, ist das vorherrschende sezernierte Protein von S. Pyogenes. Wegen seiner relativ Indiscriminant Spezifit&auml;t, dieses Enzym nachweislich der extrazellul&auml;ren Matrix, Zytokine, Chemokine, Erg&auml;nzung Komponenten, Immunglobuline und Serum-Protease-Inhibitoren, um nur einige der bekannten Substrate zu beeintr&auml;chtigen. Dar&uuml;ber hinaus reguliert aus anderen Streptokokken Proteine durch erniedrigende ihnen oder ihrer Freigabe von der bakteriellen Oberfl&auml;che. Trotz der F&uuml;lle der Literatur &uuml;ber vermeintliche aus Funktionen bleibt es viel Kontroverse &uuml;ber dieses Enzym, weil viele der gemeldeten Aktivit&auml;ten widerspr&uuml;chliche physiologische Ergebnissen f&uuml;hren w&uuml;rde. Hier &uuml;berpr&uuml;fen wir alle bekannten Host und bakterielle Protein-Substrate f&uuml;r aus, ihre Spaltung-Websites, und die Rolle dieses Enzyms in Streptokokken Pathogenese, basierend auf der aktuellen Literatur zu diskutieren.

Cystein Proteinase aus von Streptococcus Pyogenes - ein potenter Modifizierer immunologisch wichtige Host und bakterielle Proteine.

Ratiometric fluorescence detection of pathogenic bacteria resistant to broad-spectrum Î²-lactam antibiotics.

Ratiometrisch Fluoreszenzdetektion von pathogenen Bakterien gegen Breitspektrum-Beta-Lactam-Antibiotika resistent.

Peptidoglycan (PG) is the major structural component of the bacterial cell wall. Bacteria have autolytic PG hydrolases that allow the cell to grow and divide. A well-studied group of PG hydrolase enzymes are the bacteriophage endolysins. Endolysins are PG-degrading proteins that allow the phage to escape from the bacterial cell during the phage lytic cycle. The endolysins, when purified and exposed to PG externally, can cause "lysis from without." Numerous publications have described how this phenomenon can be used therapeutically as an effective antimicrobial against certain pathogens. Endolysins have a characteristic modular structure, often with multiple lytic and/or cell wall-binding domains (CBDs). They degrade the PG with glycosidase, amidase, endopeptidase, or lytic transglycosylase activities and have been shown to be synergistic with fellow PG hydrolases or a range of other antimicrobials. Due to the coevolution of phage and host, it is thought they are much less likely to invoke resistance. Endolysin engineering has opened a range of new applications for these proteins from food safety to environmental decontamination to more effective antimicrobials that are believed refractory to resistance development. To put phage endolysin work in a broader context, this chapter includes relevant studies of other well-characterized PG hydrolase antimicrobials.

Endolysins as antimicrobials.

Peptidoglycane (PG) ist die wichtigste strukturelle Komponente der bakteriellen Zellwand. Bakterien haben Autolytische PG-HYDROLASEN, mit denen die Zelle zu wachsen und sich teilen. Eine gut erforscht Gruppe PG-Hydrolase-Enzyme sind die Endolysins Bakteriophage. Endolysins sind PG-erniedrigende Proteine, die das Bakterium w&auml;hrend der Phage lytischer Zyklus von der bakteriellen Zelle entkommen zu erm&ouml;glichen. Die Endolysins, wenn gereinigtes und PG extern, ausgesetzt k&ouml;nnen dazu f&uuml;hren, dass &quot;Lyse von ohne.&quot; Zahlreiche Publikationen haben beschrieben, wie dieses Ph&auml;nomen als eine effektive antimikrobielle gegen bestimmte Erreger therapeutisch eingesetzt werden kann. Endolysins haben eine charakteristische modulare Struktur, oft mit mehreren Dom&auml;nen lytischer bzw. Zellwand-Bindung (CBD). Sie beeintr&auml;chtigen die PG mit Glycosidaseinhibitoren, Amidase, Endopeptidase oder lytische Transglycosylase T&auml;tigkeiten und haben gezeigt worden, um Synergieeffekte mit anderen PG-HYDROLASEN oder eine Reihe von anderen Antibiotika werden. Aufgrund der Koevolution von Phagen und Host wird angenommen, dass sie sind viel weniger wahrscheinlich, zum Widerstand aufrufen. Endolysin Ingenieur hat eine Reihe neuer Anwendungen f&uuml;r diese Proteine von Lebensmittelsicherheit bis Umwelt Dekontamination zu wirksamer Antibiotika ge&ouml;ffnet, die geglaubt werden, feuerfeste Widerstand Entwicklung. Dieses Kapitel enth&auml;lt um Phage Endolysin Arbeit in einem gr&ouml;&szlig;eren Zusammenhang zu stellen, relevante Studien anderer antimikrobieller Mittel gut charakterisierten PG-Hydrolase.

Endolysins als antimikrobielle Substanzen.

Bacteriophages deploy lysins that degrade the bacterial cell wall and facilitate virus egress from the host. When applied exogenously, these enzymes destroy susceptible microbes and, accordingly, have potential as therapeutic agents. The most potent lysin identified to date is PlyC, an enzyme assembled from two components (PlyCA and PlyCB) that is specific for streptococcal species. Here the structure of the PlyC holoenzyme reveals that a single PlyCA moiety is tethered to a ring-shaped assembly of eight PlyCB molecules. Structure-guided mutagenesis reveals that the bacterial cell wall binding is achieved through a cleft on PlyCB. Unexpectedly, our structural data reveal that PlyCA contains a glycoside hydrolase domain in addition to the previously recognized cysteine, histidine-dependent amidohydrolases/peptidases catalytic domain. The presence of eight cell wall-binding domains together with two catalytic domains may explain the extraordinary potency of the PlyC holoenyzme toward target bacteria.

X-ray crystal structure of the streptococcal specific phage lysin PlyC.

Bakteriophagen bereitstellen lysine, die die bakterielle Zellwand abgebaut und erleichtern Virus Ausstieg vom Host. Wenn exogen angewendet, diese Enzyme zerst&ouml;ren empf&auml;nglicher Mikroben und dementsprechend haben Potential als Therapeutika. Die potentesten Lysin bisher identifiziert ist PlyC, ein Enzym aus zwei Komponenten (PlyCA und PlyCB) zusammengesetzt, die spezifisch f&uuml;r Streptokokken-Arten. Hier zeigt die Struktur der PlyC Erfahrung, dass eine einzelne PlyCA-Gruppe zu einer ringf&ouml;rmigen Assembly acht PlyCB Molek&uuml;le angebunden ist. Struktur-gef&uuml;hrte Mutagenese zeigt, dass die bakterielle Zellwand-Bindung durch einen Spalt am PlyCB erreicht wird. Unerwartet, zeigen unsere Strukturdaten, dass PlyCA ein Glykosid Hydrolase-Bereich neben der zuvor erkannten Cystein, Histidin-abh&auml;ngige Amidohydrolases/Peptidasen katalytische Dom&auml;ne enth&auml;lt. Das Vorhandensein von acht Zellwand-Bindung-Dom&auml;nen mit zwei katalytische Dom&auml;nen mag erkl&auml;ren, die au&szlig;ergew&ouml;hnliche Wirksamkeit von der PlyC-Holoenyzme in Richtung Ziel Bakterien.

Article	Year
Extracellular proteolytic activities expressed by Bacillus pumilus isolated from endodontic and periodontal lesions. Journal of medical microbiology\| PubMed ID: 18436599	2008
A genetic screen to identify bacteriophage lysins. Methods in molecular biology (Clifton, N.J.)\| PubMed ID: 19082564	2009
Use of a bacteriophage lysin, PlyC, as an enzyme disinfectant against Streptococcus equi. Applied and environmental microbiology\| PubMed ID: 19139235	2009
Quantifying enzymatic lysis: estimating the combined effects of chemistry, physiology and physics. Physical biology\| PubMed ID: 20921589	2010
The cysteine proteinase SpeB from Streptococcus pyogenes - a potent modifier of immunologically important host and bacterial proteins. Biological chemistry\| PubMed ID: 21958079	2011
Cysteine proteinase SpeB from Streptococcus pyogenes - a potent modifier of immunologically important host and bacterial proteins. Biological chemistry\| PubMed ID: 22050223	2011
Ratiometric fluorescence detection of pathogenic bacteria resistant to broad-spectrum Î²-lactam antibiotics. Angewandte Chemie (International ed. in English)\| PubMed ID: 22246698	2012
Endolysins as antimicrobials. Advances in virus research\| PubMed ID: 22748813	2012
X-ray crystal structure of the streptococcal specific phage lysin PlyC. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America\| PubMed ID: 22807482	2012

Daniel C. Nelson

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