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A tecnologia de ressonância plasmônica de superfície (SPR) é uma técnica de detecção óptica que elimina a necessidade de rotular o analito. Ele permite o monitoramento dinâmico e em tempo real da afinidade de ligação quantitativa, cinética e termodinâmica. Essa capacidade de alto rendimento é altamente sensível e reprodutível, permitindo a medição de várias taxas de abertura, taxas de desligamento e afinidade. Além disso, a pequena quantidade de amostra necessária aumenta ainda mais a utilidade desse método 1,2. O método de detecção biomolecular de resposta rápida3, que monitora a ligação de afinidade entre biomoléculas, emergiu como uma área de pesquisa proeminente.
A tecnologia SPR tem várias aplicações no campo da pesquisa e desenvolvimento de medicamentos4. Um de seus usos é descobrir a base estrutural de alvos específicos de drogas. Também pode ser empregado para identificar os ingredientes ativos de ervas chinesas que possuem atividades farmacológicas significativas e estudar seus mecanismos para triagem e verificação de medicamentos. Gassner e col. estabeleceram uma curva dose-resposta linear para anticorpos biespecíficos por meio da determinação de SPR, o que permite a análise de concentração e controle de qualidade5. Além disso, a SPR pode ser utilizada para a realização de testes clínicos de imunogenicidade na farmacopeia e no desenvolvimento de vacinas6.
Uma área em que pode ser utilizado é na detecção de resíduos de pesticidas, resíduos de medicamentos veterinários, aditivos ilegais, bactérias patogênicas e metais pesados 7,8,9,10 em produtos agrícolas e testes de segurança alimentar. Ao usar a tecnologia SPR, a precisão e a eficiência desses testes podem ser melhoradas.
Outra área em que a tecnologia SPR pode ser aplicada é na detecção rápida de toxinas e antibióticos. Essa tecnologia permite a anexação de anticorpos virais, compostos de moléculas pequenas e aptâmeros ao chip biossensor SPR. O chip biossensor SPR detecta diferentes concentrações de RNA viral como o analito11. Esse método tem sido usado com sucesso na detecção rápida de vírus como H5N1, vírus da gripe aviária H7N9 e novo coronavírus 12,13,14. Além dessas aplicações, a tecnologia SPR também é útil em proteômica, triagem de drogas, detecção em tempo real de farmacocinética relacionada e estudo de vírus e proteínas e receptores patogênicos 15,16,17,18. É particularmente adequado para pesquisa científica e experimentos de ensino em universidades e institutos de pesquisa e é uma ferramenta valiosa em vários ambientes científicos e de pesquisa.
O princípio da SPR é o movimento oscilatório coletivo de elétrons livres na interface entre um filme metálico e o dielétrico, causado por ondas de luz incidentes19. É essencialmente a ressonância entre a onda evanescente e a onda de plasma na superfície do metal20. Quando a luz faz a transição de um meio fotodenso para um meio fotofóbico, a reflexão total ocorre sob certas condições. Do ponto de vista da óptica de onda, quando a luz incidente atinge a interface, ela não gera imediatamente a luz refletida. Em vez disso, ele primeiro passa pelo meio opticamente fóbico a uma profundidade de aproximadamente um comprimento de onda. Em seguida, flui ao longo da interface por cerca de meio comprimento de onda antes de retornar ao meio opticamente denso. Essa onda que passa pelo meio opticamente fóbico é chamada de onda evasiva, desde que a energia total da luz permaneça constante. Como o metal contém gás de elétrons livre, ele pode ser considerado plasma. A luz incidente excita a vibração longitudinal do gás de elétrons, levando à geração de uma onda de densidade de carga ao longo da interface metal-dielétrico, conhecida como onda de plasma de superfície. Essa ressonância se propaga na forma de atenuação exponencial em ambos os meios. Consequentemente, a energia da luz refletida é significativamente reduzida. O ângulo de incidência correspondente no qual a luz refletida desaparece completamente é conhecido como ângulo de ressonância21. A SPR é altamente sensível ao índice de refração do meio aderente à superfície do filme metálico20. O ângulo SPR varia com o índice de refração da superfície do filme metálico, sendo a mudança do índice de refração principalmente proporcional à massa molecular da superfície do filme metálico22. Quaisquer alterações nas propriedades do meio superficial ou na quantidade de adesão resultarão em diferentes ângulos de ressonância. Assim, a interação molecular pode ser analisada examinando as mudanças no ângulo de ressonância.
Esta análise óptica SPR não destrutiva, sem rótulos e em tempo real, baseada nos princípios acima, é adequada para pesquisas em vários campos. Portanto, demonstramos o deslocamento angular da curva SPR e os resultados experimentais por meio de análise multiciclo, tomando como exemplo a combinação de quercetina e calicosina com a proteína recombinante KCNJ2.